基因治疗基础【65页】.pptxVIP

基础;一.基因治疗概念;;目的基因（targetgenes）--针对所治疾病而选用的外源基因（全长基因或cDNA）

其他遗传物质--非基因的核酸片段（如反义核,siRNA）

载体（vector）基因或核酸片段转运到特定细胞内的工具，一般包括病毒载体和非病毒载体两大类。

受体细胞或靶细胞（targetcells）--接受外源基因或其他遗传物质的细胞。

根据靶细胞类型，基因治疗可分为两大类：

生殖细胞基因治疗(germcellgenetherapy)

体细胞基因治疗(somaticcellgenetherapy);

;1989.5firstgenemarking，1989年美国FDA同意先将载体导入作为“基因标记”的临床试验，

1990.9FDA批准基因治疗的正式临床试验。基因治疗正式应用于人类遗传病和癌症的首次临床实验（firstGTinhumans，SCID-ADAdeficiency)：

(1).FrenchAnderson用逆转录病毒介导的基因转移纠正T-淋巴细胞腺苷酸脱氨酶（ADA）缺乏；

(2).SteveRoserberg采用转导了肿瘤坏死因子基因的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)治疗晚期癌症。

他们均取得一定程度的成功，从而引发了基因治疗的狂热期。从1990~1995年，就有100多个临床方案经FDA批准进入临床实验。1995年美国NIH对已实施的基因治疗临床试验进行了初步评估，发现一百几十个方案中确证有效的只有几个。于是提出当务之急是要加强基础研究，解决基因治疗中的关键问题，从而使基因治疗的研究从狂热转入了理性化的正常轨道。

2002636GTclinicaltrials(3496patients);三、基因治疗的策略和实施方式;(1)直接体内法(invivo)，或称一步法。

(2)间接体内法(exvivo)，或称二步法、回体转移法。;四、基因治疗的基本步骤和方法;五、受体细胞的选择

----基因治疗的靶细胞和靶组织;1.干细胞：一种具有复制能力、可以形成各种组织的早期未分化细胞;;骨髓中至少含有两种干细胞：

造血干细胞Hematopoeiticstemcells（HSC）

骨髓间质干细胞Bonemarrowstromalcells（MSC）

HSC一般处于静止期，必要时才进入细胞周期

多能干细胞(造血干细胞,HSC)

红系祖细胞

定向干??胞(造血祖细胞,HPC)巨核系祖细胞

单核系祖细胞

成熟的终末细胞

;(1).造血干/祖细胞(HS/PC)

优点:;(2).骨髓间质干细胞;2.成体细胞及组织;2.1成纤维细胞;2.2肌细胞;2.3淋巴细胞;(2).肿瘤浸润淋巴细胞（tumorinfiltratinglymphocyte，TIL）

主要获自实体瘤组织或癌性胸水、腹水等，具有肿瘤病灶趋向性。

在IL-2的刺激下，从肿瘤组织分离的TIL体外培养能大量扩增，存活时间可超过100天，回输到体内后能聚集于病灶部发挥抗肿瘤作用而对机体不构成威胁，因而是较为理想的靶细胞。;2.4血管内皮细胞;直接与血液接触，表达的目的基因产物易于分泌入血而发挥作用。对心血管系统疾病如高血压、动脉粥样硬化以及某些全身性疾病是较为理想的靶细胞。

Cioffi等将经apoE基因转导的内皮细胞植回apoE基因敲除小鼠体内，获得了使该动物模型因缺乏apoE所致的高胆固醇血症和动脉粥样硬化病变明显减轻的效果，表明内皮细胞可作为产生治疗性蛋白质的场所。;2.5皮肤组织;2.6眼组织和神经组织;六、载体的构建;七、基因转移;（一）非病毒法;化学方法

（1）DNA-磷???钙共沉淀（DNA-Ca3(PO4