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质粒DNA的提取和纯化实验报告--第1页
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质粒DNA的提取和纯化实验报
告
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质粒DNA的提取和纯化实验报告--第1页
质粒DNA的提取和纯化实验报告--第2页
实验一、质粒DNA的提取和纯化
一、实验目的：
1、学习并掌握碱裂解法小量制备质粒DNA的方法。
2、初步了解DNA纯化的原理。
二、实验原理
1、细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不
等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传
成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也
会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传
递到后代。
2、质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可获得大
量纯化的质粒DNA分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取，本实验采
用碱裂解法提取质粒DNA。
3、碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：
当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液
后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与
染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。
4、纯化质粒DNA的方法通常是利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性
质。例如，氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚
乙二醇分级沉淀等方法，但这些方法相对昂贵或费时。对于小量制备的质粒
DNA，经过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质
和RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规
亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。
三、实验步骤
1、挑取单菌落接种到含Amp的LB液体培养基试管内（3.5ml/管）
2、将试管放入恒温震荡培养箱中，37℃，200r/min培养12-16h。
质粒DNA的提取和纯化实验报告--第2页
质粒DNA的提取和纯化实验报告--第3页
3、将菌落转入1.5ml离心管中（尽量倒满）1200r/min，离心30s（沉淀
菌体）
4、重复一次第三步的过程
5、弃掉上清液并扣干，加入预冷的Solution1100微升，剧烈震荡打散菌
体
6、加入新配置的Solution2200微升，温和颠倒试管6-7次混匀，室温放
置5min，使液体由浑浊变为透明粘稠
7、加入预冷的Solution3150微升，温和颠倒离心管2-3次，震荡7-8
次，之后在1200r/min离心7min
8、小心将含有质粒DNA的上清液转移到另一离心管中（400-500微升）
9、加等体积的氯仿
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