细胞培养概述课件.pptxVIP

细胞培养概述;细胞培养;美国时代杂志展望未来最热门的医药生物领域如下;细胞培养的优点;２．可获取纯种细胞：组织中有多种细胞共存，只有通过细胞培养，才能获取纯种细胞

３．体外实验：可在体外进行试验，试验条件易于控制

测试试验流程：用细胞培养筛选药物建立体外动物模型临床试验临床

４．可应用各种先进科技手段进行研究

５．细胞可无限期深低温保存，并随时可取用

;６．比动物实验快速价廉：如下例

ａ美国国立癌症研究所筛选药物：

每种药物测试五种浓度，６０种不同肿瘤细胞进行测试，历时一周，花费２００美元。

每星期可进行１２万次试验，筛选４００种药物（只有以细胞培养为基础才能做到）

ｂ建立体外模型进行药物筛选：由于使用细胞培养技术筛选药物，大大提高了筛选效率。９０年代短短十年间，共有３６种药物被批准应用于抗肿瘤及相关病症的治疗，比以前４０余年中所有被批准的抗肿瘤药物总和还多

;７．可在体外作人类实验，无道义及法律问题;一、培养细胞的生长条件;细胞培养常用器材处理方法;一、玻璃器材（各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等）

浸泡（自来水）、刷洗（洗衣粉）、清洁液处理（24小时）、流水冲洗、蒸溜水浸泡和冲洗、50℃烘干包装杀菌。一般用121℃磅高压蒸气灭菌20分钟。

二、塑料器材（多孔培养板、培养皿、培养瓶及吸嘴等）

塑料器皿若反复使用：使用后，先用自来水浸泡冲洗、晾干，再用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜，用自来水充分冲洗，双蒸水冲洗，晾干。采用紫外线直接照射或辐照灭菌办法。清洗时要防止产生划痕。

三、橡皮器材

选择质软、耐高温、毒性小的橡皮制品(最好是硅制品)。新购置的自来水冲洗去，5%氢氧化钠煮沸15分钟，自来水冲洗，4%盐酸煮沸15分钟，自来水冲洗，单蒸水冲洗，双蒸水(或去离子水)冲洗，晾干后包装或置于铝盒内，用121℃高压蒸气灭菌20分钟。;四、金属器材（解剖器械，剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等）

新的金属器材，先用纸擦去表面的油脂，再用洗衣粉煮沸，水洗，擦干后再用95%酒精纱??擦干，包装或置铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。已用过的金属器材，及时用酒精棉球擦干净，灭菌。

五、其他物品

纱布、注射器的针头等；

各种人工合成培养液、缓冲液和酶等、过滤除菌。

消毒灭菌前所用的包装材料可用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒和特制玻璃（或金属）消毒筒等，可根据器材大小、形态选用，采取局部包装或部分包装，并用线绳扎紧。;水：新鲜配置的三蒸水或去离子水

平衡盐溶液(balancedsaltsolution，BSS)又称生理盐水或盐溶液，是细胞培养中常用的基本液体。它主要由无机盐和葡萄糖配制而成，起着维持渗透压、缓冲和调节酸碱度等重要作用。

配液时注意：（1）用水；配制先后顺序；称量，要看清药品的规格、纯度、结晶水的数量等。（2）物质的纯度，常用的纯度有优级纯(特级纯)，分析纯（AR）和化学纯（CD）三种。（3）物质的可溶性，避免沉淀析出。（4）物质的稳定性，如葡萄糖只能在10磅下维持15～20分钟。（5）贮存液通常先配制成10倍或100倍的一系列母液，用前临时混合和稀释，过滤除菌备用。

常用的缓冲液：生理盐水、PB、PBS(注意有无钙镁离子)、

Hanks液（含有钙镁离子、葡萄糖、酚红）;pH调节液

(1)碳酸氢钠液可根据需要与使用方便配制10%以下的各种浓度。先用双蒸水溶解后，需经过滤除菌，分装小瓶中。亦可使用高压蒸气灭菌，密封，4℃冰箱保存。市售有5%～10%浓度的安瓿封装品，使用也很方便。在调节pH过程中或超过要求值时，可用高压灭菌的10%醋酸溶液或以CO2调节之。

(2)Hepes缓冲液是一种可以保持细胞培养过程中pH值较长时间稳定的氢离子缓冲剂。通常使用浓度为10～15mmol/L。配制时，称取所需的Hepes量，用培养液溶解，用1mmol/LNaOH调节pH至7.0，过滤除菌分装小瓶中，4℃冰箱保存。;消化液

(1)胰蛋白酶溶液，一种黄白色粉末，易受潮，应密封放置阴暗干燥处。它的主要作用是使细胞间的蛋白质水解，从而使贴壁细胞从瓶壁上脱落并使细胞游离分散开来。常用浓度为0.25%或5%胰蛋白酶。

(2)EDTA(乙烯二胺与乙酸或Versene)溶液EDTA是一种化学螯合剂，毒性小，对贴壁细胞有离散作用。一般使用浓度为0.02%。称0.1gVersene溶解于500ml无钙镁离子磷酸缓冲液中，15磅30分钟高压灭菌，4℃或室温保存。

(3)胰蛋白酶－EDTA的配制0.5%胰蛋白酶液96mL，1%EDTA液4ml，无钙镁离子缓冲液100ml。;抗生素溶液

为防止细胞培养过程中发生污染，一般在培养液中加入青霉素钠盐