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饲料中玉米赤霉烯酮的测定

1范围

本文件描述了饲料中玉米赤霉烯酮的液相色谱-串联质谱和高效液相色谱法。

本文件适用于植物性饲料原料、配合饲料、精料补充料和浓缩饲料中玉米赤霉烯酮的测定。

本文件的检出限为2μg/kg、定量限为10μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4液相色谱-串联质谱法（仲裁法）

4.1原理

试样中的待测物用乙腈水溶液提取，提取液用磷酸盐缓冲溶液稀释，经免疫亲和柱净化，用液相色

谱-串联质谱仪测定，基质匹配标准曲线校准，外标法定量。

4.2试剂或材料

警示——玉米赤霉烯酮毒性很强，操作时注意避免接触皮肤和衣物，带上医用乳胶手套。各种有机试剂小心操作，

取用应在通风橱中进行。

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

4.2.1水：GB/T6682，一级。

4.2.2甲醇：色谱纯。

4.2.3乙腈：色谱纯。

4.2.4甲酸：色谱纯。

4.2.5氯化钠。

4.2.6氢氧化钠溶液（0.2mol/L）：称取8.0g氢氧化钠，用水溶解，转移至1000mL容量瓶中，定容，

混匀。

4.2.780%乙腈溶液：量取800mL乙腈（4.2.3）于1000mL容量瓶中，用水稀释、定容，混匀。

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4.2.80.1%甲酸溶液：移取1mL甲酸（4.2.4）于1000mL容量瓶中，用水稀释、定容，混匀。

4.2.9磷酸盐缓冲溶液（PBS）：称取8.0g氯化钠、1.16g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化

钾，用水溶解稀释定容至1000mL，用氢氧化钠溶液（4.2.6）调节pH至7.4。

4.2.10乙腈-0.1%甲酸溶液：量取100mL乙腈（4.2.3）于1000mL容量瓶中，用0.1%甲酸溶液（4.2.8）

稀释、定容，混匀。

4.2.11标准储备溶液（100μg/mL）：称取玉米赤霉烯酮标准品（CAS号：17924-92-4，纯度不低于99.5%）

10mg（精确至0.01mg）于100mL容量瓶中，用乙腈（4.2.3）溶解、定容，混匀。－18℃以下贮存，

有效期12个月。

4.2.12标准中间溶液（10μg/mL）：准确移取5mL标准储备溶液（4.2.11）于50mL容量瓶中，用乙

腈（4.2.3）稀释、定容，混匀。－18℃以下贮存，有效期6个月。

4.2.13标准系列溶液：准确移取适量的标准中间溶液（4.2.12）于10mL容量瓶中，用乙腈-0.1%甲酸

溶液（4.2.10）配制成质量浓度分别为2ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL的标准

系列溶液。临用现配。

4.2.14玉米赤霉烯酮免疫亲和柱：柱容量≥1.5μg，柱回收率≥80%（验证方法参见附录A），或性能

相当者。

4.2.15微孔滤膜：0.22μm，有机系。

4.3仪器设备

4.3.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

4.3.2电子天平：精度0.01g、0.00001g。

4.3.3涡旋混合器。

4.3.4超声波清洗器：功率≥250W。

4.3.5离心机：转速≥10000r/min。

4.3.6氮吹仪：温控范围30℃~60℃。

4.3.7固相萃取装置。

4.3.8空气压力泵。

4.4样品

按GB/T20195规定制备试样，至少200g，粉碎使其全部通过0.425mm孔径的试验筛，混合均匀，

装入密闭容器中，备用。选取类型相同、均匀一致、且在待测物保留时间处，仪器响应值小于方法定量

限30%的饲料样品，作为空白样品。

4.5试验步骤

4.5.1提取

平行做两份试验。称取试样约5.0g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，准确加入0.5g氯化

钠（4.2.5）和25mL80%乙腈溶液（4.2.7），涡旋混合2min，在25