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开题人：赵怡姣导师：宋红生日期：2014.12.29CREB抗体结合的家蚕蛋白及其与滞育关系的研究上海大学生命学院2013级研究生开题报告

目录2014/12/2921.研究目的和意义2.研究内容和方法4.预期困难和对策3.前期工作

研究目的和意义家蚕2002年国际无脊椎动物协会将家蚕确定为鳞翅目模式昆虫。易于饲养和繁殖大小适中，可操作性强全基因组测序经济型昆虫，唯一实现产业化生产的昆虫。2014/12/293

研究目的和意义家蚕滞育2014/12/294Lifecycle卵幼虫蛹成虫卵滞育脑调控DH分泌的分子机制？长时程记忆？环境诱导CREB

研究目的和意义家蚕CREB的研究现状2014/12/295图1.不同滞育系家蚕E4时期BmCREB表达。A.二化品种大造LW、DL孵育的E4胚胎的BmCREB表达。B.一化与多化品种家蚕E4时期的BmCREB表达。BA

研究目的和意义2014/12/296图2.A.左图为WesternBlot感光胶片与PVDF膜的叠合图，右图为SDS经过R250拷染后的凝胶图；B.WesternBlot验证SDS割胶后回收的蛋白的结果。（34KD）（24KD）~35KD—~25KD—

2014/12/297图3.图3.不同滞育系家蚕E4时期目的基因的表达。A.一化与多化品种家蚕胚胎E4时期的目的基因的表达。B.二化品种大造LW、DL孵育的胚胎E4时期目的基因的表达。AB

研究内容和方法2014/12/298BmCREB蛋白的表达情况不同滞育系胚胎全身幼虫及蛹期不同组织CREB蛋白检测Westernblot（CREB抗体）一化（3009）、二化（大造）及多化（Nis)家蚕BmCREBb的鉴定BmCREBb敲除转基因大造LWBmCREBb过表达转基因大造DC检测BmCREBb的基因和蛋白表达情况PCR、Westernblot观察次代卵滞育情况分析与CREB抗体结合的蛋白与家蚕滞育的关系

预期困难和对策2014/12/299BmCREBb的鉴定构建CREB敲除转基因家蚕基因蛋白水平检测CREB表达情况构建目的基因（7611/2513）细胞转染质粒细胞转染蛋白水平检测CREBb表达情况构建目的基因（7611/2513）转基因家蚕基因蛋白水平检测CREBb表达情况制作新抗体检测CREBb表达情况

前期工作2014/12/2910NisConNisKOCREBaCREBbActin图1.图1.转基因家蚕Nistari品系胚胎E4时期CREB表达情况。图2.图2.转基因家蚕Nistari品系胚胎E4时期creb基因表达情况。1000——400——100——700——

前期工作2014/12/2911gen—400——100——700——图3.图3.二化性家蚕DaizoLWE4时期目的基因表达情况。

2014/12/2912Thanksforyourattention!