生物活性肽抗氧化性测定方法 DPPH和ABTS法.pdf

GB/T××××—201×

生物活性肽抗氧化性测定方法DPPH和ABTS法

1范围

本标准规定了DPPH和ABTS法测定生物活性肽抗氧化性能的方法。

本标准适用于生物活性肽抗氧化性能测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

生物活性肽bioactivepeptide

对生物体的生命活动具有特定调控作用的肽类化合物。

第一法清除DPPH•自由基法

4原理

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）是一种暗紫色棱柱状结晶，在无水乙醇溶液中呈深紫色，DPPH•

自由基在可见光区517nm处出现强吸收峰。该法原理是通过DPPH提供的1个稳定的DPPH•自由基与抗氧化

性肽提供的1个电子配对结合，使DPPH的特征性紫色消失，变为无色或浅黄色，通过紫外可见分光光度计

测定反应后的吸光度，根据吸光度值评价抗氧化肽的抗氧化能力。

5试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

5.1水：GB/T6682一级。

5.250μg/mLDPPH溶液

精确称取DPPH0.0050g，无水乙醇定容至100mL，超声波清洗机300Hz~1000Hz避光超声25min，

使其充分溶解后作为DPPH测定溶液。该溶液应现用现配。

5.310.0mg/mL谷胱甘肽溶液

精确称取还原型谷胱甘肽（CHNOS，CAS：70-18-8）0.0100g，蒸馏水定容至1.0mL，充分混合

101736

均匀，配成母液。

6仪器设备

6.1分光光度计，波长范围为400nm~800nm，吸光度值精确至0.01。

6.2电子天平，感量值为0.0001g。

7操作步骤

7.1样品制备

精确称取生物活性肽样品0.0100g，蒸馏水定容至1.0mL，充分混合均匀，配成10.0mg/mL的母液。

用蒸馏水将母液稀释至不同倍数，得到不同浓度的待测溶液。

注：水溶性好的样品，直接用蒸馏水溶解与定容；水溶性差的样品，先溶于二甲基亚砜（DMSO），再用蒸馏水定容。

2

GB/T××××—201×

7.2测定

取3支试管，分别编号为1、2、3号，每支试管中按照表1的组合添加试剂。

在1号试管中加入3.0mLDPPH溶液和1.0mL生物活性肽待测样品溶液，作为实验组（As）；在2号

试管中加入1.0mL待测样品溶液和3.0mL无水乙醇溶液，作为对照组（Ac）；在3号试管中加入3.0mL

DPPH溶液和1.0mL无水乙醇溶液，作为空白组（Ab）。分别充分混合均匀后，室温避光反应30min，于

波长517nm条件下，用紫外分光光度计测定其吸光度值（蒸馏水调零校准）。

表1各试管中试剂的添加量

1号试管（As）2号试管（Ac）3号试管（Ab）

DPPH3.0mL—3.0mL

待测样品1.0mL1.0mL—

乙醇—3.0mL1.0mL

本测定方法设定阳性对照组，为谷胱甘肽溶液，将谷胱甘肽替代上述测定方法中的生物活性肽待测样

品溶液，其余同上述测定方法。

8结果计算

清除率按式（1）计算：