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PCR设计引物原则.docx

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    ①引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。

    ②引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

    ③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易消灭非特异条带。ATGC最好随机分布，避开5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

    ④避开引物内部消灭二级构造，避开两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形

    成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

    ⑤引物3’端的碱基，特别是最末及倒数其次个碱基，应严格要求配对，以避开因末端碱基不配对而导致PCR失败。

    ⑥引物中有或能加上适宜的酶切位点，被扩增的靶序列最好有

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