（正式版）H-Y-T 228-2018 藻类脂肪酸的测定 气相色谱法（正式版）.docxVIP

ICS07.060;13.060.01

Z17

中华人民共和国海洋行业标准HY/T228—2018

藻类脂肪酸的测定气相色谱法

Determinationoffattyacidsinalgae-gaschromatography

2018-02-13发布

2018-05-01实施

国家海洋局发布

I

HY/T228—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由国家海洋局提出。

本标准由全国海洋标准化技术委员会(SAC/TC283)归口。

本标准起草单位：国家海洋局第一海洋研究所、中国科学院海洋研究所、中国海洋大学。本标准主要起草人：杨佰娟、李倩、郑明刚、郑立、韩笑天、刘涛、朱明壮、陈发荣。

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HY/T228—2018

藻类脂肪酸的测定气相色谱法

1范围

本标准规定了藻类中脂肪酸的气相色谱测定方法。

本标准适用于藻类中脂肪酸的测定。其他藻类中脂肪酸的测定可参考使用。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3方法原理

藻类样品中的脂肪酸，经氢氧化钠甲醇溶液皂化和盐酸甲醇溶液甲酯化，经正己烷提取后，用气相色谱法测定。

4试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1氢氧化钾(KOH)。

4.1.2盐酸(HCl)。

4.1.3氯化钠(NaCl)。

4.1.4正己烷(C?H??):色谱纯。

4.1.5甲醇(CH?OH):色谱纯。

4.1.6无水硫酸钠(Na?SO?):400℃灼烧4h,冷却后密闭保存，有效期1个月。

4.2试剂配制

4.2.1饱和氢氧化钾甲醇溶液：称取40g氢氧化钾溶解在100mL甲醇中，搅拌溶解，澄清备用，室温下可放置2个月。

4.2.2盐酸甲醇溶液(1mol/L):量取10mL盐酸溶解在110mL甲醇中，混匀，室温下可放置2个月。

4.2.3饱和氯化钠溶液：称取360g氯化钠溶解在1L蒸馏水中，搅拌溶解，澄清备用，室温下可放置2个月.

4.3标准品

4.3.1十一碳酸甘油三酯，纯度大于99%。

4.3.2十一碳酸甲酯标准品，纯度大于99%。

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HY/T228—2018

4.3.3混合脂肪酸甲酯标准品。

4.3.4单个脂肪酸甲酯标准品(可根据需求购买),纯度大于99%。

4.4溶液的配制

4.4.1十一碳酸甘油三酯内标溶液(0.15mg/mL):准确称取15mg十一碳酸甘油三酯(4.3.1)至100mL容量瓶中，用甲醇定容，冰箱4℃避光冷藏保存，有效期1个月。

4.4.2单个脂肪酸甲酯标准溶液(1mg/mL):准确称取100mg脂肪酸甲酯标准物质(4.3.4)于100mL容量瓶中，用正己烷定容，贮存于一20℃冰箱，有效期3个月。

4.4.3混合脂肪酸甲酯标准溶液(10μg/mL):取出适量脂肪酸甲酯混合标准溶液(4.3.3)移至10mL容量瓶中，用正已烷定容，配制成脂肪酸甲酯标准物质浓度为10μg/mL溶液。贮存于一20℃冰箱，有

效期3个月。

5仪器和设备

5.1气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。

5.2电热恒温水浴锅：控温范围25℃~100℃,控温精度±1℃。

5.3电子天平：感量0.1mg。

5.4粉碎机。

5.5具塞离心管。

5.6容量瓶。

5.7研钵。

6分析步骤

6.1藻粉的制备

藻类经冷冻干燥24h。干燥后大型藻经过粉碎机(4.4)粉碎过80目筛，微藻直接进行6.2。

6.2皂化

用天平称取藻粉约20mg,放入研钵(5.7)中，准确加入0.2mL十一碳酸甘油三酯内标溶液(4.4.1),加入液氮反复研磨2次～3次，每次5min,用6.0mL饱和氢氧化钾甲醇溶液(4.2.1)分2次~3次将研磨后的藻粉转移至具塞离心管(5.5)中，混匀。将离心管放入60℃水浴锅内加热处理60min,每隔10min取出振荡5s～10s,处理结束后取出离心管冷却至室温。

6.3甲基化

皂化后的试样加入4mL1mol/L盐酸甲醇溶液(4.2.