高效液相色谱法 (1).pdf

9高效液相色谱法

HighPerformanceLiquid

Chromatography，HPLC

9.1.1HPLC与LC的比较

9.1概述9.1.2HPLC与GC的比较

9.1.3应用

9.2.1高压输液系统

9.2高效液相色谱仪9.2.2进样系统

9.2.3色谱柱

9.2.4检测器

9.3HPLC流动相和固定相简介9.3.1流动相

9.3.2固定相载体

9.4.1液液分配色谱法

9.4.2离子交换色谱法

9.4.3离子色谱法

9.4HPLC方法各论9.4.4离子对色谱法

9.4.5空间排阻色谱法

9.4.6亲和色谱法

9.4.7色谱分离方法的选择

9.5.1定性分析

9.5HPLC的分析和应用9.5.2定量分析

9.5.3应用

9.6制备液相色谱

9.7毛细管电泳

9.8超高效液相色谱

9.9高速逆流色谱

9.10超临界流体色谱

Agilent1100

美国MILLI-QElix5超纯水器

9.1概述

高效液相色谱法(HPLC)是以溶剂液体为流动相的色谱

方法。

按照分离机制不同可分为：液固吸附色谱法；液液分

配色谱法；离子交换色谱法；离子对色谱法；离子色谱

法；空间（尺寸）排阻色谱法(凝胶过滤、渗透色谱法)。此

外，还有亲和色谱法等。

早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1～

5cm，长50～500cm的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱

流速，填充的固定相颗粒直径多在150～200μm范围内。即

使这样，流速仍然很低(1mL/min)，分析时间仍然很长！

当加压增加流速(真空或空气泵)时，尽管分析时间减

少，但柱塔板高度Hmin也相应增加了！或者说柱效下降了。

为了解决分析时间及柱效问题，人们认识到：最为有效地

增加柱效的唯一方法是减小填充物的粒径（1.5～10μm）！

直到60年代，由于在高压下操作的液压设备、高效固定相

以及高灵敏检测器的出现及发展，才彻底解决了分析时间及柱

效的问题。即所谓的高效液相色谱技术才真正得到广泛应用。

9.1.1HPLC与LC的比较

高速：HPLC采用高压输液设备，流速大大增加，分析速度极

快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分

析需时数小时。

高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力

小，因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质

的分离。

高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g,荧光检测器—

—10-11g。

9.1.2HPLC与GC的比较

分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化

合物，而这些物质只约占有机物总数的20%；HPLC可以

分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物