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淀粉酶及其同工酶
分类
血清淀粉酶同工酶分成S(唾液型)型和P(胰型)。
关于淀粉酶同工酶的研究
除了胰腺、腮腺疾病外还有一些疾病如胆囊炎、小肠梗阻、消化道溃疡穿孔、异位妊娠、恶性肿瘤等也可出现血清淀粉酶活性增高，可能的原因之一就是这些患病组织含有淀粉酶，在炎症时通过各种途径入血引起血清淀粉酶活性增高。但至今国内外对于各种人体组织淀粉酶含量的研究报告甚少。我们收集了部分正常人体组织，经匀浆后测出匀浆上清液中的总淀粉酶(Amy)活性，并用抑制法测定唾液型和胰型淀粉酶同工酶(S-Amy和P-Amy)，从而为探讨临床上血清淀粉酶增高机制提供了实验依据。
1 材料
仪器 BeckmanClinicalSystem700型生化分析仪。高速台式离心机，KD-300
组织匀浆器。
试剂 淀粉酶活性测定采用上海长征公司淀粉酶试剂盒(PNPG
4
法)。淀粉酶抑制
物，为小麦唾液淀粉酶抑制蛋白，由上海长征医院临床酶学研究室纯化和提供［1］。
材料和样品采集 意外死亡的正常人3名，2名男性分别为25岁、28岁，1名女性55岁，于死亡后6h内采集样品，取胰腺、腮腺、胃、空肠、回肠、输卵管、子宫、肺、
胆囊、骨骼肌和睾丸组织，各取20g左右。
2 方法
组织匀浆液的制备 每种组织重复取样6次，每次取500mg，先用生理盐水清洗，
加入pH7.4的0.01mol/LNaHPO-NaHPO缓冲液2ml后置组织匀浆器中进行匀浆。匀浆
2 4 2 4
器转速为15000r/min，时间为30s×4次。将匀浆液3000r/min离心10min。离心完
毕后，吸取上清液进行总淀粉酶和淀粉酶同工酶测定。此步可使95%以上的细胞破碎并释放出淀粉酶［2］。
淀粉酶及其同工酶测定［3］。
测定参数 温度37°C，波长405nm，延迟时间60s，测定时间120s，因数
7000。
淀粉酶总活性测定 50μl生理盐水加10μl匀浆上清液加500μl底物液，按上述测定参数测定，如果总淀粉酶活性＞1000U/L，则用生理盐水稀释后再进行测定。
胰淀粉酶活性(P-Amy) 50μl抑制剂加10μl匀浆上清液，37°C温育10min，再加入500μl底物液，按上述参数测定，得剩余Amy活性(R-Amy)。结果计算及校正：总Amy(U/L)=7000×ΔA/min。R-Amy(U/L)=7000×抑制后ΔA/min(U/L)。由于该抑制剂对
S-Amy的抑制率为97.5%，对P-Amy的交叉抑制率为20%，故P-Amy(U/L)=1.29R-Amy－0.0323
×总Amy。S-Amy(U/L)=总Amy－P-Amy。
3 结果与讨论结果见表1与表2。
表1 各脏器组织淀粉酶及其同工酶活性( ±s)
脏
器
总Amy(U/g) P-Amy(U/g) S-Amy(U/g)
P-Amy/总Amy(%)
胰腺
(2.1±0.4)×106 (2.1±0.4)×106 0
100
腮腺
(6.6±0.6)×106 0 (6.6±0.6)×106
0
骨骼肌
(6.7±1.9)×10－2 0 (6.7±1.9)×10－2
0
输卵管
(2.5±0.7)×102 0 (2.5±0.7)×102
0
子宫
(1.7±0.5)×102 0 (1.7±0.5)×102
0
睾丸
(3.7±0.8)×103 (3.7±0.8)×103 0
100
空肠
(6.3±1.8)×102 (5.6±1.4)×102 (6.5±1.8)×10
89.7±3.2
回肠
(3.2±0.5)×102 (2.4±0.5)×102 (7.7±0.8)×10
76.0±5.6
胃
(8.3±1.5)×102 0 (8.3±1.5)×102
0
胆囊
(4.7±1.2)×102 (2.1±0.7)×102 (2.6±0.9)×102
42.5±8.6
肺
(2.7±0.9)×102 0 (2.7±0.9)×102
0
血清(U/ml)
0.086±0.020 0.027±0.065 0.059±0.018
33.0±6.9
组 织
表2 人组织相对于血清中淀粉酶的活性倍数
相对倍数 组 织
相对倍数
胰腺
2.5×107 腮腺
8.2×107
胃
9.6×103 空肠
7.3×103
胆囊
5.5×103 回肠
3.7×103
睾丸
4.3×104 输卵管
3.1×103
子宫
1.7×103 骨骼肌
0.78
肺
3.1×103
本文测定的11种脏器中，以腮腺、胰腺单位重量内所含淀粉酶活性最高，
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