免疫沉淀试验.ppt

****************************************************************技术评价：1.简便、快速,敏感度较双扩提高8-16倍，可测蛋白质浓度达ug/ml.2.要求抗原、抗体比例严格3.不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测第53页,共78页，2024年2月25日，星期天抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰，抗体浓度固定时，峰的高度与抗原量呈正相关。单向免疫扩散＋电泳,定量检测技术（二）火箭免疫电泳第54页,共78页，2024年2月25日，星期天1.2%巴比妥琼脂糖约55℃，加入适量抗血清，混匀后制板，打孔，孔内加待测样品，样品孔放负极侧，6h后观察琼脂板上沉淀峰，绘制标准曲线，求出待测样品浓度。技术要点（二）火箭免疫电泳第55页,共78页，2024年2月25日，星期天火箭免疫电泳图①②③④为标准抗原；⑤⑥为标本-+（二）火箭免疫电泳示意图第56页,共78页，2024年2月25日，星期天结果判定：1、定性：直接观察、染色2、定量：根据峰高-浓度标准曲线计算3、为提高灵敏度，可加入少量125I标记的标准抗原共同电泳，则可在含抗体的琼脂中形成不可见的火箭峰第57页,共78页，2024年2月25日，星期天原理：区带电泳＋双向扩散1、将蛋白质抗原在凝胶中电泳分成肉眼不可见的若干区带2、沿电泳方向挖一与之平行的抗体槽，加入相应抗血清进行双向扩散（三）免疫电泳第58页,共78页，2024年2月25日，星期天根据各蛋白所处的电泳位置,可分为:白蛋白区、球蛋白区、?1区、?2区、?区、?区+--ALB?1?2??白蛋白抗胰蛋白酶触珠蛋白转铁蛋白IgG前白蛋白酸糖蛋白铜蓝蛋白C3aC3bCRP?1脂蛋白抗糜蛋白酶巨球蛋白第59页,共78页，2024年2月25日，星期天第60页,共78页，2024年2月25日，星期天第61页,共78页，2024年2月25日，星期天1.纯化抗原和抗体成分的分析2.正常及异常免疫球蛋白的识别与鉴定应用免疫电泳第62页,共78页，2024年2月25日，星期天-+（三）免疫电泳示意图第63页,共78页，2024年2月25日，星期天第64页,共78页，2024年2月25日，星期天技术评价：1.分辨率较高2.仅定性3.扩散时间长，影响因素多，结果较难分析4.目前大量应用于纯化抗原和抗体成分的分析及正常和异常体液蛋白的识别与鉴定。第65页,共78页，2024年2月25日，星期天抗原抗体在凝胶中直接发生沉淀反应，在适当位置形成抗原抗体复合物，经染色后，可对各类免疫球蛋白及其轻链进行分型原理区带电泳＋沉淀反应（四）免疫固定电泳第66页,共78页，2024年2月25日，星期天左图为IgGκ型,中图为IgGλ型，右为正常SPGAMκλSPGAMκλSPGAMκλ（四）免疫固定电泳示意图第67页,共78页，2024年2月25日，星期天原理：待检蛋白电泳固定剂及各类抗血清加于凝胶表面的泳道抗原与对应抗体反应沉淀漂洗染色某一抗原的存在?第68页,共78页，2024年2月25日，星期天分辨率强，敏感度高，操作周期短，仅需数小时，结果易于分析。应用最常用于M蛋白的鉴定与分型，也用于尿中本周氏蛋白质的检测与κ、λ分型，脑脊液中寡克隆蛋白的检测与分型。优点（四）免疫固定电泳第69页,共78页，2024年2月25日，星期天应用:M蛋白的鉴定和分型第70页,共78页，2024年2月25日，星期天（五）交叉免疫电泳（六）自动化免疫电泳第71页,共78页，2024年2月25日，星期天第四节免疫沉淀试验的临床应用

免疫浊度法：蛋白质的检测

如免疫球蛋白、补体、类风湿因子、C反应蛋白等

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