高效液相色谱仪使用方法.pptx

高效液相色谱仪使用方法

汇报人：XXX

2024-01-25

目录

contents

高效液相色谱仪概述

样品前处理

色谱条件设定

仪器操作与数据分析

故障诊断与维护保养

实验安全与环保要求

高效液相色谱仪概述

01

VS

高效液相色谱仪（HPLC）是一种基于液相色谱技术的分离和分析方法，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

高效液相色谱仪的原理是利用物质在固定相和流动相之间的分配平衡，通过不断改变流动相组成或柱温等条件，使被测组分在色谱柱内反复进行吸附、解吸、再分配的过程，从而达到分离的目的。

定义与原理

数据处理系统

对检测器输出的电信号进行处理，得到色谱图和各组分的定量结果。

检测器

将色谱柱流出的组分进行检测，转换为电信号输出。

色谱柱

装有固定相，用于分离样品中的各组分。

高压输液泵

提供稳定、连续的高压流动相，保证色谱柱内流动相的稳定流动。

进样器

将待测样品注入色谱柱，实现样品的进样。

仪器组成及功能

广泛应用于化学、化工、医药、食品、环保等领域中的复杂样品分析，如药物成分分析、食品添加剂检测、环境污染物监测等。

应用领域

高效液相色谱仪具有分离效果好、分析速度快、灵敏度高、自动化程度高等优点，对于复杂样品的分离和分析具有重要意义。同时，随着技术的不断发展，高效液相色谱仪的应用范围也在不断扩大，为各领域的科学研究和技术创新提供了有力支持。

意义

应用领域与意义

样品前处理

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样品选择与准备

根据分析需求，对样品进行适当的预处理，如研磨、粉碎等，以便于后续提取和净化操作。

选择具有代表性的样品，确保样品能够真实反映被分析物的性质。

根据被分析物的性质，选择合适的提取溶剂和方法，如振荡提取、索氏提取等，确保被分析物充分溶解在提取溶剂中。

提取方法

采用适当的净化技术，如液液萃取、固相萃取等，去除干扰物质，提高分析的准确性和灵敏度。

净化方法

提取与净化方法

通过蒸发、旋转蒸发等方法将提取液浓缩至适当体积，以便于后续进样分析。

根据分析需求，将浓缩后的样品用适当的溶剂定容至所需体积，保证进样分析的准确性和可重复性。

浓缩与定容操作

定容操作

浓缩操作

色谱条件设定

03

根据分析物的性质选择合适的色谱柱类型（如C18、C8、硅胶等）。

确定色谱柱的规格（如长度、内径、粒径等）。

按照仪器说明书正确安装色谱柱，确保柱头密封良好，避免漏液。

色谱柱选择与安装

优化流动相的pH值，以获得最佳的分离效果。

根据需要添加有机溶剂或缓冲盐，调整流动相的强度和选择性。

根据分析物的溶解性和色谱柱的要求选择合适的流动相组成。

流动相配制及优化

根据分析物的吸收特性选择合适的检测波长。

调整检测器的灵敏度，以获得合适的信号强度和噪音水平。

对于荧光检测器，还需设置激发波长和发射波长。

检测波长与灵敏度设置

仪器操作与数据分析

04

打开电源开关，启动液相色谱仪。

打开电脑，启动色谱工作站软件。

连接液相色谱仪与电脑，确保通讯正常。

进行仪器初始化，包括设置流动相、流速、柱温等参数。

01

02

03

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开机与初始化流程

准备样品

清洗进样针

进样

注意事项

将待测样品溶解在适当的溶剂中，过滤去除杂质。

将进样针插入进样口，注入适量样品。

用纯溶剂清洗进样针，避免残留物对分析结果的影响。

避免进样针碰触进样口内壁，以免损坏色谱柱；确保样品中不含不溶性颗粒，以免堵塞色谱柱。

设置数据采集参数

开始数据采集

数据处理

结果分析

数据采集与处理技巧

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根据实验需求设置采集时间、峰宽、阈值等参数。

点击软件中的“开始采集”按钮，启动数据采集。

使用色谱工作站软件对采集到的数据进行处理，包括峰识别、积分、校正等步骤。

根据处理后的数据，计算样品的浓度、纯度等指标，并生成相应的图谱和报告。

故障诊断与维护保养

05

常见故障类型及原因

流动相配比不正确、流动相污染或流动相中气泡过多。

色谱柱污染、色谱柱过载或色谱柱老化。

检测器故障、检测器灵敏度下降或检测器响应异常。

管路连接处松动、密封件老化或系统压力过高。

流动相问题

色谱柱问题

检测器问题

系统泄漏

观察仪器面板显示、指示灯状态及流动相流动情况，判断是否存在故障。

观察法

将故障仪器与正常仪器进行对比，找出差异点，确定故障范围。

对比法

用备件替换可能损坏的部件，观察故障是否消除。

替换法

按照系统流程逐步排查，找出故障点并进行修复。

逐步排查法

故障诊断方法与步骤

定期检查管路连接处和密封件，确保系统密封良好，防止泄漏。

定期清洗色谱柱，避免色谱柱过载和老化。

定期更换流动相和清洗液，保持系统清洁。

定期检查检测器性能，确