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一、液体深层发酵苏云金杆菌类生产工艺及培养基配方虽可有异,但生产过程基本上是相似的。武汉微生物农药厂生产青虫菌(蜡螟变种)的工艺方法大致如下。砂土管菌种——→茄瓶斜面——→无菌空气种子罐培养基——→发酵罐——→发酵液——→填充罐轻质碳酸钙——→过滤滤液弃去——→调浆罐滤饼——→
菌浆加展着剂喷雾干燥菌粉质量检查成品第32页,共43页,2024年2月25日,星期天种子罐培养是为扩大生产繁殖足够数量的健壮而纯洁的种子发酵罐培养是细菌大量繁殖并形成芽孢和晶体的阶段第33页,共43页,2024年2月25日,星期天二、半固体发酵苏云金杆菌类半固体发酵目前常用的方法有三级扩大培养和一步扩大培养等。(一)三级扩大培养生产工艺流程砂土管菌种——→斜面菌种——→液体种子——→扩大培养——→半固体浅盘培养——→干燥粉碎包装。第34页,共43页,2024年2月25日,星期天(二)一步扩大培养采用半固体浅盘发酵,但以工业生产的菌粉作为种子,省略了斜面菌种和种子扩大培养两个步骤。将灭菌过的半固体培养基倒在消毒过的塑料薄膜上,用质量高的工业菌粉(每克含活芽孢100亿)按配料干重的1%量抢温接种(培养基温度可在80℃),拌匀后用塑料薄膜包起热闷10分钟,以达减少杂菌和催芽目的。然后打开塑料膜摊放在浅盘上培养。其他步骤与三级扩大培养法同。第35页,共43页,2024年2月25日,星期天三、细菌性中毒病发病规律卒倒杆菌及毒素通过污染桑叶,经口食下传染。而高温多湿的条件,有利于病原细菌的传播与蔓延。第36页,共43页,2024年2月25日,星期天(一)传染来源卒倒杆菌是兼性寄生菌,除可寄生于活体外,还可在死体及腐殖质上大量繁殖,而且可以广泛存在于土壤及水等场所中。主要传染来源有桑园害虫如桑尺蠖、桑盗毒蛾(桑毛虫)、桑螟、桑蟥及其他野外昆虫均可感染卒倒杆菌,其排泄物及尸体均能污染桑叶而传染蚕;蚕沙处理不当或水源不洁,患本病的蚕尸体及排泄物散落在蚕室、蚕具或用作地面育的表土上,都可引起感染;与蚕区相间的棉田或稻田施用细菌农药(如青虫菌、杀螟杆菌等)而处理不当,或把施用过细菌农药的稻草挪作养蚕用时,将是直接引起本病的主要原因。第37页,共43页,2024年2月25日,星期天(二)蚕座内传染病蚕排泄物及尸体流出的污液是蚕座传染的主要来源。蚕食下卒倒杆菌的菌体及毒素引起急性中毒发病死忙,根据卒倒杆菌的生物学特性,此期间体内或排出的毒素很少甚至没有,因此不能致病或致病力很弱。但在潮湿的蚕座上经一定时间后,便可形成大量的芽孢及毒素,则致病力大为加强。第38页,共43页,2024年2月25日,星期天(三)环境因素高温多湿是本病发生的重要原因。阴雨多,温度大,排湿困难,特别是连续喂食湿叶的情况下,造成蚕座潮湿、蒸热,有利于病菌的繁殖和传播而不利于蚕的健康,容易大量发生细菌性中毒病。第39页,共43页,2024年2月25日,星期天四、细菌性中毒病的诊断(一)肉眼鉴定本病前期症状不易被察觉,只是表现为突然停止食桑,胸部略膨胀,有痉挛性颤动,刚死时体色无变异,死后受触尸体有硬块,头部缩入呈勾嘴状,胸部略膨大,第1—2腹节略伸长,有轻度尸僵现象是其明显的特征。第40页,共43页,2024年2月25日,星期天(二)显微镜检察取病蚕消化道内容物制成临时玻片标本,镜检可观察到大量大型杆菌及芽孢,但必须检到伴孢晶体才能确诊。遇病蚕急性中毒在短时间内死忙,不易检到芽孢及晶体时,可将病蚕尸体放置一定时间后再行观察。检察方法是:将临时标本涂片后作热固定,用1%结晶紫或石炭酸复红染色,在油镜下可看到营养菌体及伴孢晶体着色较深,而芽孢则不易着色,可资鉴别。第41页,共43页,2024年2月25日,星期天(三)生物鉴定将病蚕尸体放置一定时间后,加无菌水研磨,将上清液添食于蚁蚕(或小蚕),如引起急性中毒即可确诊。有条件时可将病蚕消化道内容物进行细菌分离培养,从分离的菌落中检查有无芽孢及伴孢晶体。必要时可将之添食于蚁蚕,如引起急性中毒病,即可确诊。第42页,共43页,2024年2月25日,星期天感谢大家观看第43页,共43页,2024年2月25日,星期天关于昆虫病原细菌昆虫受细菌感染而引起的疾病称之为细菌病,细菌病的共同特征是当昆虫被细菌感染以后,都不再活动,食欲减退,以后口腔与肛门有排泄物排出等现象。大多数的病原菌
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