实验报告 脂类的化学——苏丹三染色.docxVIP

山东大学实验报告 2016年03月16日

姓名 xxxx 班级 xxxxxx 同组人 xxxxxxxx

科目 细胞生物学实验 题目 脂类的化学——苏丹Ш染色 组别 第2组

一． 实验目的

熟悉脂类的显示技术。

了解脂类在细胞中的分布。二． 实验原理

脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪

酸、胆固醇、鞘磷脂等。很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。

脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。

脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用如下方法：冰冻切片，明胶包埋冰冻切片，铺片法。

本实验中使用的脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪。当它与含有脂类的标本接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂结构中使其显色。

三． 实验仪器及试剂

仪器

解剖盘，解剖剪，镊子，盖玻片，载玻片，显微镜，胶头滴管

试剂

苏丹Ш染液，甲醛钙溶液，70%乙醇溶液，蒸馏水

材料

小白鼠一只

四． 实验步骤

断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，并在其下放置一载玻片，用剪将连同载玻片和其上粘着的肠系膜取下。滴加甲醛钙于有标本的载玻片处，使标本润湿，固定分钟。

将蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管吸取液体以冲净固定液。

用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作，再进行一次冲洗。

第1页共4页 山东大学细胞生物学实验报告

山东大学实验报告 2016年03月16日

姓名 xxxx 班级 xxxxxx 同组人 xxxxxxxx

科目 细胞生物学实验 题目 脂类的化学——苏丹Ш染色 组别 第2组

用苏丹Ш染色30分钟。

吸干溢出的染液，擦净盖玻片表面及周边，显微镜观察。五． 实验结果

图1小鼠肠系膜毛细血管及周围脂肪细胞

图2小鼠单个脂肪细胞，细胞核呈“指环状”

第2页共4页 山东大学细胞生物学实验报告

山东大学实验报告 2016年03月16日

姓名 xxxx 班级 xxxxxx 同组人 xxxxxxxx

科目 细胞生物学实验 题目 脂类的化学——苏丹Ш染色 组别 第2组

六．讨论与结论

实验中出现的问题

在这次实验中，我们的小鼠肠系膜标本染色不深，很多地方甚至出现了没有染上的现象。虽然最终还是观察到了单个脂肪细胞的形状，但是由于染色太浅，观察到的结果不是十分理想。经过思考，我认为可能是我们在染色的时候没有及时向拨片上补充染液，中间只添加了一次染液，导致染色效果不好。也有可能是选取小鼠的肠系膜毛细血管处过厚，多层细胞堆积在一起。

注意事项

染色后，要用吸水纸吸去染液后再观察，这样只有脂肪细胞被染色，便于观察。

在制片时动作一定要轻，以免将小鼠的肠系膜破坏。

观察时要选取有毛细血管的肠系膜部分，因为血管周围一般有脂肪组织保护。

染色过程中要不断滴加苏丹三染液，防止装片干燥，影响实验结果。

不要用力按压盖玻片，以免压破脂肪细胞，影响观察。七． 拓展知识

石蜡切片制备：

石蜡切片的制作过程主要包括：取材、固定、脱水、透明、透蜡、封藏、透明、染色、贴片、切片、包埋。

糖类细胞化学

PAS法显示糖类

原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合成红色，定位于胞浆上。

结果：PAS阳性为红色，细胞核蓝色。

核酸细胞化学

Feulgen反应法

原理：标本经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子,