石蜡切片HE染色观察.docxVIP

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（八）石蜡切片HE染色观察1、实验目的

观察热胁迫下中草药添加剂对大鼠的胃、肝、小肠主要的消化腺的变化

2、实验材料与设备

实验材料 热胁迫下的大鼠，然后取其胃、肝、小肠。

实验设备

切片机 恒温箱 温台 水浴锅 熔蜡炉 显微镜

其他材料

蜡杯切片刀酒精灯蜡铲展片台解剖刀解剖针解剖剪解剖盘培养皿吸管镊子单面刀片台木马克笔洒精灯包埋纸盒烧杯盖玻片载玻片玻片盘树胶树胶瓶温度计瓷杯

2、试剂

卡诺氏固定液FAA固定液各种浓度的酒精

二甲苯2 瓶石蜡蜂蜡埃利希苏木精染液1%伊红酒精溶液1%盐酸酒精溶液甘油蛋白粘片剂郝普特氏粘片剂中性树胶1%番红1%固绿1%过碘酸Schiff试剂0.5%偏重亚硫酸钠溶液醋酸酐-吡啶混合液 0.5%~1%淀粉糖化酶溶液

3、实验步骤

苏木精-伊红对染法一、目的要求

1、熟悉石蜡切片的制作过程。

2、掌握HE染色的基本原理和染色方法。二、实验原理

石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。

三、实验用品

（一）器材

切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。

（二）试剂

卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。

试剂配法：

1、卡诺氏固定液：100%酒精3份冰醋酸1份或：100%酒精6份氯仿3份 冰醋酸1份

2、埃利希苏木精染液的配法：

苏木精1g 纯酒精50ml 冰醋酸5ml 甘油50ml 钾矾（硫酸铝钾）约5g（饱和量） 蒸馏水50ml

配法：

ⅰ、将苏木精溶于约15ml的纯酒精中，再加冰醋酸后搅拌。

ⅱ、当苏木精溶解后即将甘油倒入并摇动容器，同时加入其余的酒精。ⅲ、将钾矾在研钵中研碎并加热，然后将它溶解于水中。ⅳ、将温热的钾矾溶液一滴一滴地加入上述染液中，并随时搅动。ⅴ、此液混合完毕，将瓶口用一层纱布包着小块棉花塞起来，放在暗处通风的地方，并经常摇动以促进它的成熟。成熟时间约3~4周。若加入0.2g碘酸钠，可立刻成熟。此液稳定而染色均匀，染核效果良好，不会发生沉淀，长期贮备无妨。此液可分别与伊红等进行二重染色。

3、1%伊红酒精溶液：

伊红1g溶于100ml95%酒精溶液。

4、1%盐酸乙醇液盐酸1份

70%酒精100份

5、甘油蛋白贴片剂：蛋白50ml

甘油50ml

水杨酸钠（防腐剂）1g

配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。此时在其中再加等量的甘油，稍稍振摇使两者混合。最后加入防腐剂（水杨酸钠）作防腐用。可保存几个月。

（三）材料

大鼠鼠胃、肝、小肠三、实验程序

1、取材

颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或小肠）。切取的组织块不宜太大，以便固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10mm

×10mm×2mm为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块2~3mm厚。取材的注意事项：

取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。

切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。

2、固定

将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入卡诺固定液中固定，固定30~50min。

固定的注意事项：

一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。

有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。

固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1~2次新液。

材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。

1、洗涤

材料经固定后，除乙醇外，组织中的固定液必须冲洗干净，尤其