动物布鲁氏菌病诊断技术.pdfVIP

目次

1范围7

2规范性引用文件7

3缩略语7

4生物安全防护8

5临床诊断8

5.1流行特点8

5.2临床症状9

5.3病理变化10

5.4结果判定10

6样品采集、保存、运输及处理10

6.1器材10

6.2试剂11

6.3样品采集11

6.4样品保存和运输11

6.5样品处理11

7病原学诊断方法12

7.1萋-尼氏（Ziehl-Neelsen）抗酸染色涂片镜检12

7.2分离与鉴定13

7.3实时荧光PCR方法15

7.4重组酶介导等温扩增检测方法（RAA）18

7.5多重PCR方法19

8免疫学诊断方法20

8.1标准血清20

8.2虎红平板凝集试验（RBT）21

8.3补体结合试验(CFT)22

8.4间接ELISA抗体检测方法(iELISA)26

8.5竞争ELISA抗体检测方法(cELISA)29

8.6荧光偏振试验（FPA）31

8.7血清凝集试验（SAT）36

8.8基于天然半抗原的双向免疫琼脂扩散试验（AGID-HN）（仅适用反刍动物）

41

8.9全乳环状试验(MRT)（仅适用牛）42

8.10免疫层析抗体检测方法(ICA)44

8.11布鲁氏菌素皮内试验(BST)45

9诊断结果综合判定46

9.1可疑动物的判定46

9.2患病动物的判定46

附录A（资料性）检测方法适用目的和特性47

附录B（资料性）布鲁氏菌培养基配制49

附录C（规范性）生化反应试剂配制50

附录D（规范性）布鲁氏菌种型和生物型鉴定51

附录E（规范性）荧光PCR、RAA及多重PCR引物和探针序列53

附录F（资料性）荧光PCR、RAA及多重PCR反应体系配制55

附录G（规范性）电泳缓冲液和琼脂糖凝胶配制57

附录H（规范性）布鲁氏菌种型PCR鉴定判定标准58

附录I（规范性）补体结合试验试剂配制59

附录J（资料性）补体结合试验溶血素的效价测定60

附录K（资料性）补体结合试验补体制备及效价测定62

附录L（资料性）补体结合试验抗原效价测定66

附录M（规范性）补体结合试验溶血素标准比色管制备方法68

附录N（规范性）补体结合试验受检血清稀释与灭活69

附录O（规范性）ELISA试验溶液的配制70

附录P（规范性）血清凝集试验试剂配制71

附录Q（规范性）血清凝集试验参照比浊管制备71

附录R（资料性）琼脂扩散试验结果示意图72

动物布鲁氏菌病诊断技术

1范围

本文件规定了动物布鲁氏菌病的临床诊断、病原学诊断、免疫学诊断的方法、实验操作

程序和诊断结果综合判定等相关技术要求。

本文件适用于动物布鲁氏菌病的净化场和无疫区（小区）认证、个体动物感染确诊、根

除计划实施、流行病学调查及监测、检疫监管、引入动物检测等。每种检测方法的适用性

见附录A。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期

的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括

所有的修改单)适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样本采集、保存与运输技术规范

3缩略语

cELISA竞争酶联免疫吸附试验(