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基因工程中有关限制酶的高考试题归类解析

王松〔辽宁省沈阳市同泽高中110000〕

手机：Email：luckywangsong@163.com

新人教版选修三的内容包括基因工程，细胞工程，胚胎工程，生态工程等内容，大局部内容都是记忆性的，在高考中的难度要求比拟低，本人认为在近几年的高考题中难度最大的就是基因工程中有关限制酶的使用，现归纳如下：

11种限制酶酶切造成的载体与目的基因的自身成环

例1〔2023年高考海南卷26题〕图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。据图答复：

〔1〕将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有、、 三种。假设要从这些连接产物中别离出重组质粒，需要对这些连接产物进行。

〔2〕用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是；接种到含青霉素培养基中，能生长的原核宿主细胞所含的连接产物是

；

〔3〕在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是。

〔1〕目的基因—载体连接物，载体--载体连接物，目的基因--目的基因连接物

；别离纯化

〔2〕载体--载体连接物；目的基因--载体连接物，载体--载体连接物

〔3〕EcoRI和BamHI

解析：此题〔1〕中用一种限制酶EcoRI酶切含有目的基因的DNA与质粒表达载体，目的基因以及质粒表达载体带有的切口是相同的，完全可以自身成环，为了防止自身成环，可以采用两种酶切位点不同的限制酶进行酶切。

例2(2023高考题江苏卷27题)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请答复以下问题：

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〔1〕一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有个游离的磷酸基团。〔2〕假设对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性

越。

越

〔3〕用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是。〔4〕与只使用EcoRI相比拟，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA

的优点在于可以防止。〔5〕为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并参加酶。〔6〕重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。

〔7〕为了从cDNA文库中别离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

【答案】〔1〕0、2〔2〕高

〔3〕SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因

〔4〕质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化

〔5〕DNA连接〔6〕鉴别和筛选含有目的基因的细胞

〔7〕蔗糖为唯一含碳营养物质

解析：〔1〕中的问题是一个新的问法，由于脱氧核糖与磷酸交替连接，质粒分子含有2

条链，故有2个游离的磷酸基团。〔3〕与〔4〕与上一例题的〔1〕和〔3〕很相似。

1.2限制酶的选择，不可以破坏标记基因

(10江苏)〔8分〕下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请答复以下问题：

3

〔1〕一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有▲个游离的磷酸基团。

〔2〕假设对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越▲。

〔3〕用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是▲。

〔4〕与只使用EcoRI