动物细胞培养实验2.docxVIP

实验题目：动物细胞培养教 师：XXX

实验类型：综合

学 时：26(参考)

内 容：一、实验目的

通过本实验了解原代细胞与传代细胞培养的基本方法以及在细胞培养过程中严格的操作程序。

初步掌握无菌操作的基本原则，认识无菌操作在细胞培养中的重要性。二、实验原理

原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官）经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。

细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外生长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。二是严格控制无菌操作。

三、试剂与器材

材料出生后2-3天的乳鼠

试剂平衡盐液－Hank液 细胞消化液0.5%水解乳蛋白-Hank液 犊牛血清 碳酸氢钠1万单位/ml青、链霉素3%谷氨酰胺 磷酸盐缓冲液

实验器材镊子解剖刀剪眼科剪眼科镊纱布块玻璃漏斗量筒记号笔试管试剂瓶三角瓶移液管培养皿培养瓶吸管橡皮头显微镜血细胞计数板计数器酒精灯酒精棉球试管架试管解剖板碘酒棉球口罩二氧化碳培养箱超净工作台灭菌锅倒置显微镜

四、实验内容

原代培养：取肾→消化分散组织→计数与稀释→分装培养→观察。传代培养：配置培养液→消化细胞→细胞计数→培养观察。

培养细胞冷冻保存。

五、关键步骤及注意事项

1.注意无菌操作，及时更换培养液。六、思考题

简述细胞传代培养的操作程序注意事项？

细胞培养获得成功的关键要素是什么？

简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。