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一种基于蔗糖致死基因(SacB)高效筛选蔗糖异构酶突变体的方法,本发明基于蔗糖致死基因SacB在基因反向筛选标记中的应用构建了高效蔗糖异构酶的筛选体系。该方法主要包括:1)底盘宿主在SIase和SacB融合表达/双质粒各表达时致死的蔗糖临界浓度的确认;2)利用易错PCR对SIase进行建库,获得一系列SIases*,将其组装到质粒上;3)致死浓度下对含有SIases*质粒的菌株进行生死筛选;4)存活的菌株进行提质粒测序及重新转化,摇瓶发酵确定其产量。本发明利用蔗糖异构酶(SIase)和蔗糖致死基
(19)国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号CN117487833A
(43)申请公布日2024.02.02
(21)申请号202311436872.8C12N1/21(2006.01)
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