DB34_T 3653-2020 番鸭胚垂直传播病毒(RT-)PCR检测技术规范.docxVIP

ICS?65.020.30

B?41

DB34

安 徽 省 地 方 标 准

DB?34/T?3653—2020

番鸭胚垂直传播病毒(RT-)PCR?检测

技术规范

Technical?regulation?for?detection?of?vertical?transmission?viruses?by?(RT-)PCR?from

Muscovy?Duck?embryos

文稿版次选择

2020?-?06?-?22?发布 2020?-?07?-?22?实施

安徽省市场监督管理局 发?布

DB34/T?3653—2020

前 言

本标准按照?GB/T?1.1-2009?给出的规则起草。

本标准由安庆永强农业科技股份有限公司提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安庆永强农业科技股份有限公司、福建省农业科学院畜牧兽医研究所、利辛县绿

墅养殖专业合作社、安徽黄氏番鸭食品有限公司、阜阳市农业科学院。

本标准主要起草人：刘荣昌、刘友生、蒋晓璐、汪敏、赵巧珍、傅秋玲、黄瑜、黄永强、万春和、

郭大伟、傅光华、施少华、程龙飞。

I

DB34/T?3653—2020

番鸭胚垂直传播病毒(RT-)PCR?检测技术规范

1??范围

本标准规定了番鸭胚垂直传播病毒（RT-）PCR检测技术的术语与定义、仪器与设备、试剂和材料、

操作步骤和结果判定。

本标准适用于番鸭胚垂直传播病毒的（RT-）PCR检测。

2??规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T?6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB?19489 实验室?生物安全通用要求

GB/T?27401 实验室质量控制规范?动物检疫

《禽流感防治技术规范》（农医发[2007]12号）

3??术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

番鸭胚垂直传播病毒 Vertical?transmission?virus?in?Muscovy?duck?embryo

可以通过番鸭胚垂直传播的病毒统称，包括鸭甲肝病毒?1?型（Duck?Hepatitis?Virus?type?1,

DHAV-1）、鸭甲肝病毒?3?型（Duck?Hepatitis?Virus?type?3,?DHAV-3）、番鸭细小病毒（Muscovy?Duck

Parvovirus,?MDPV）、鹅细小病毒（Goose?Parvovirus,?GPV）、番鸭呼肠孤病毒（Muscovy?Duck?Reovirus,

MDRV）、新型番鸭呼肠孤病毒（Novel?Muscovy?Duck?Reovirus,?N-MDRV）、H9?亚型禽流感病毒（H9?subtype

of?Avian?Influenza?Virus,?H9-AIV）。

4 仪器与设备

4.1??PCR?扩增仪。

4.2??台式低温高速离心机，温控范围：-4℃～25℃。

4.3??电泳仪，电压范围：60～120?V。

4.4??紫外凝胶成像系统。

4.5??组织匀浆器。

4.6??微波炉。

4.7??水浴锅，温控范围：37℃～100℃。

4.8??微量移液器，可调控量程：0.5～10?μL，10～100?μL，100～1000?μL。

1

病毒名称

引物

预期片段大小说明

DHAV

F:5’-AGGCCCAGAAGCATTCAAACA-3’

R:5’-TGGGTGTTTTACGTGTACTC-3’

DHAV-1为?258?bp，DHAV-3为?321?bp

GPV?和?MDPV

F:5’-CAATGGGCTTTTACCAATATGC-3’

R:5’-ATTTTTCCCTCCTCCCACCA-3’

641?bp

MDRV

F:5’-GAATCGTGGTCTAGCGAC-3’

R:5’-CTCGCATCTGCTGATCATAATTACC-3’

580?bp

N-MDRV

F:5’-ACCTCAGGATATCGCTGAAACT-3’

R:5’-CTCCATCCCTGCAGCACATGTAAAG-3’

600?bp

H9-AIV

F:5’-TCAACAAACTCCACCGAAACTGT-3’

R:5’-TCCCGTAAGAACATGTCCATACCA-3’

732?bp

DB34/T?3653—2020

5??试剂和材料

5.1??10％的十二烷基磺酸钠。

5.2??RNA?提取试剂?Trizol。

5.3??三氯甲烷。

5.4??焦炭酸二乙酯（DEPC）处理水，实验用水应符合?GB/T?6682?的要求。

5.5??磷酸盐缓冲液（PBS），见附录?A.1。

5.6??蛋白酶?K（10?mg/mL），见附录?A.2。

5.