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大肠杆菌表达的新一代重组人内皮抑素复性条件的优化的开题报告

题目：大肠杆菌表达的新一代重组人内皮抑素复性条件的优化

一、研究背景

内皮抑素（Endostatin）是一种具有广泛生物学功能的抗血管生成蛋白，能够抑制新生血管的生长并通过多种途径抑制肿瘤发生和转移。然而，由于内皮抑素的生产量很少并且纯化困难，严重限制了其在临床中应用的发展。因此，利用基因工程技术大量生产内皮抑素已成为了研究的热点。

大肠杆菌系统是利用重组DNA技术制备重组蛋白的主要平台之一。然而，内皮抑素的复性存在非常大的挑战，主要通过体外重组和其他方法进行。因此，本研究将探讨如何优化大肠杆菌表达的内皮抑素复性条件，提高内皮抑素的产量和复性效率，以满足其在临床应用中的需求。

二、研究目的

本研究旨在通过对大肠杆菌表达的内皮抑素复性条件的优化，提高内皮抑素的产量和复性效率，从而为其规模生产和临床应用提供可靠的基础。

三、研究方法

1.构建内皮抑素表达系统

选择具有高表达能力的大肠杆菌作为表达宿主，将内皮抑素编码基因克隆进表达载体中，利用IPTG诱导表达。

2.内皮抑素复性条件的优化

通过改变不同的重组蛋白处理条件（如温度、pH值、添加物、还原剂等），探究影响内皮抑素复性的关键因素，并优化复性条件。

3.内皮抑素复性效率的检测

采用SDS、Westernblot等方法检测内皮抑素在不同条件下的复性效率，并对复性效率最高的条件进行实验验证。

四、研究意义

通过对大肠杆菌表达的内皮抑素复性条件的优化，可以大幅提高内皮抑素的产量和复性效率，降低生产成本，为其在规模生产和临床应用中提供可靠的基础。此外，本研究还可以为其他抗血管生成蛋白的研究提供参考和借鉴。