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条件性基因敲除的原理和设计原则 Fl ox 小鼠一般要通过设计构建打靶载体、胚胎干细胞重组、雯胚显微注射、， 和嵌合体小鼠传代来获得 这种小鼠跟Cr e 工具小鼠交配， 旧于Cr e 的表达，介导两个 LoxIP 位点序列的重组，从而敲除两个LoxP 之间的序列已由 于不同Cr e 工具小鼠的 C工e 表达有组织I细胞特异性， 就可以达到在不同组织，、细胞里特异性敲际目的基臣的目标。比如上 皮细胞、胸腺细胞、T 细胞、B 细胞、心肌细胞、肠道、肺脏等9 那如何设计条件性基因敲陈小鼠呢？这里所说的设计主要是 Fl ox 小鼠的设计。所惘条件性敲院， 是说除了特定细胞外，其它细胞里面没有任何的基因表达异常。一般情况下，， 不要在第一个外显 前厮放皿l axP 序列。因为第一个外显子前而一般是启动于。放盟LoxP 序列有可能会破坏或改 变启动千活性i 条件性敲除一般是敞掉最早引 起移码突变的外显子。这样的话，最好不要敲侔有起始密码子.A.TG的 外显子口 否则的话，， 基因可能会利用0即 豹的 ATG 编码一个缺少部分N 端序列的蛋白， 这个蛋白很可能有全部或部分野生蛋白的功能。在选抒要敲除的外显子的时候（各放一个 Lox P 在一个外显子的两侧），该外显子的碱基数日不能是3N，否则新基因pr e- RNA 拼接得到的咄NA 不能产生移码突变凸 会产生一个与野生蛋白相比少了一段中间序列的新蛋白巳 如果一个 外琵子的辣基数目是3N+l 或 3N+2, 敲除这个外畏 ？ 之后会产生移码突变， 就 可以达到基因敲除的目的 句筛 选要敲除 {Fl oxed) 的外显子闪时候， 一般是从最上防气 的外显子开始筛选适合 敲除的外显子。需要注意的是， 一般的叭A 分析软件不能确定内含子和外显千的边界， 需要仔细核对。95％以上的边界遵循 gt / ag 边界原 则 则心也 可 以在 Ensembl 上查一个基因的外显子和内含子。这个网站上 的结果绝大部分是正确的。但也需要仔细核对。毕竟基因敲除小鼠研 发是一个时间比较长的过程，儒要特别小心。前期做多少的考虑都不 嫌多。这些原则只是对一般课题的考虑。特殊情况需要特殊处理。比 如，如果只是想敲除一个基因的某个特定 domai n, 或是如果一个基 因有一个很大的外显子，这个时候即使这个外显子的碱基数目是3N, 也可以对其进行敲除a