第三章细胞生物学研究方法(4学时).pptVIP

2. 特异蛋白抗原的定位与定性 3. 细胞内特异核酸的定位与定性 4. 放射自显影技术 1. 离心分离技术 第二节 细胞组分的分析方法 本文档共46页；当前第28页；编辑于星期三\10点23分 一、 离心分离技术 ?用途：分离细胞器与生物大分子及其复合物 ?差速离心：分离密度不同的细胞组分 ?密度梯度离心：精细组分或生物大分子的分离 本文档共46页；当前第29页；编辑于星期三\10点23分 差速离心 本文档共46页；当前第30页；编辑于星期三\10点23分 密度梯度离心 常用的介质： 蔗糖、氯化铯、甘油等。 本文档共46页；当前第31页；编辑于星期三\10点23分 二、特异蛋白抗原的定位与定性 ?免疫荧光技术 快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限 ?免疫电镜技术 ?免疫胶体金技术 应用：能对蛋白进行精细定位。如通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动态；胞内酶的研究；膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等。 ?蛋白电泳(SDS)与免疫印迹反应(Western-Blot) 本文档共46页；当前第32页；编辑于星期三\10点23分 免疫荧光技术图片示例 本文档共46页；当前第33页；编辑于星期三\10点23分 L/O/G/O 细胞生物学研究方法 进行初步观察 形成可验证的假说 设计试验 收集资料 解释结果 作出合理结论 查阅已 有知识 生物学研究模式生物是基于 不同物种享有共同分子机制 本文档共46页；当前第1页；编辑于星期三\10点23分 Caenorhabditis elegans Drosophila melanogaster Arabidopsis thaliana 本文档共46页；当前第2页；编辑于星期三\10点23分 第三章 细胞生物学研究方法 第一节 细胞形态结构的观察方法 第二节 细胞组分的分析方法 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 本文档共46页；当前第3页；编辑于星期三\10点23分 第一节 细胞形态结构的观察方法 1 光学显微镜技术（light microscopy） 2 电子显微镜技术 (Electro microscopy) 3 扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope ) 本文档共46页；当前第4页；编辑于星期三\10点23分 一、光学显微镜技术（light microscopy) ?普通复式光学显微镜技术 ?荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?激光共焦扫描显微镜技术（Laser Scanning Confocal Microscopy） ?相差显微镜（phase-contrast microscope）（自习） 本文档共46页；当前第5页；编辑于星期三\10点23分 普通复式光学显微镜技术 分辨率是指区分开两个质点间的最小距离 本文档共46页；当前第6页；编辑于星期三\10点23分 普通光学显微镜 本文档共46页；当前第7页；编辑于星期三\10点23分 各种显微镜的分辨率梯度 本文档共46页；当前第8页；编辑于星期三\10点23分 荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） 原理 本文档共46页；当前第9页；编辑于星期三\10点23分 荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?应用 ?直接荧光标记技术 ?间接荧光标记技术(免疫荧光标记技术) ?用于特异蛋白质等生物大分子的定性 定位：如绿色荧光蛋白(GFP)的应用 本文档共46页；当前第10页；编辑于星期三\10点23分 应用：绿色荧光蛋白 本文档共46页；当前第11页；编辑于星期三\10点23分 激光共焦扫描显微镜技术（Laser Scanning Confocal Microscopy） ?原理： ?应用： 排除焦平面以外光的干扰，增强 图像反差和提高分辨率(1.4—1.7倍)， 通过“光切片”观察样品内部结构，可 重构样品的三维结构。 本文档共46页；当前第12页；编辑于星期三\10点23分 激光共焦扫描显微系统(Confocal System) 本文档共46页；当前第13页；编辑于星期三\10点23分 Pine Tree pollen - collected on a Bio-Ra