叶绿素含量的测定标准.docxVIP

叶绿素含量的测定标准可以根据不同的方法来确定。其中，分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法。该方法基于叶绿素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在特定波长下测定其吸光度，然后根据朗伯-比尔定律计算出提取液中各色素的含量。以下是使用分光光度法测定叶绿素含量的标准步骤： 原理：根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即：A=acl。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，a 为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等丁各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。已知叶绿素a、h的80%丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的吸光系数分别为82.04和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式： Ca=13.95A665-6.88A649 Cb=24.96A649-7.32A665 Cx=(1000A470-2.05Ca-114.8*Cb)/245 最终，叶绿素含量计算公式为： 叶绿素含量（mg/g）= （色素浓度 mg/L * 提取液体积 ml * 稀释倍数）/(1000 * 样品鲜重 g)。通常操作选取的叶片大概为0.1g，剪碎放入装有5ml 95%以纯的10ml离心管中，暗处理24h，即可测量其吸光度。 注意事项： a. 提取过程中要保证研磨充分，并且避免长时间暴露在空气中，以免叶绿素分解。 b. 分光光度计在使用前需要进行校准，以保证测量的准确性。 c. 测定过程中需要控制好空白试验和样品处理的条件，以避免误差的产生。 d. 在计算过程中需要注意单位的统一和换算。