改良骨髓间充质干细胞体外培养的方法的中期报告.docxVIP

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2023-11-05 发布于上海
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改良骨髓间充质干细胞体外培养的方法的中期报告本研究旨在改良骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）的体外培养方法，以提高其生长速率、纯度和更好的细胞功能。在本研究的前期，我们通过单因素试验、响应曲面法和Box-Behnken设计法对培养基成分进行了优化研究，并确定了最佳的培养基配方。目前进入了中期实验阶段，其中包括以下内容： 1. BM-MSCs的初代扩增与子代传代：从健康人骨髓穿刺取出骨髓组织，经过离心沉淀分离出单个细胞，将其在最佳培养条件下进行初代培养，在7-10天后，BM-MSCs增殖至高密度，进行子代传代并固定生长条件。 2. BM-MSCs的纯化：采用负向筛选法，通过使用CD14和CD34等标记物，除去血细胞、内皮细胞等非骨髓间充质细胞，使得BM-MSCs的纯度得到提高。 3. 细胞活力的测定：采用MTT法和Cell Counting Kit-8法检测BM-MSCs的代谢活力，并比较传统培养条件和改良培养条件下细胞的生长速率和代谢能力。 4. 免疫表型检测：通过流式细胞术或免疫荧光染色，检测BM-MSCs的CD90、CD105、CD73、CD45、CD34和CD14等表型特征，检测细胞的不同培养条件对其表型的影响。本研究的中期报告将集中讨论以上内容的实验进展及其结果分析，并且对研究后续的实验设计和方向进行进一步的探讨。