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黄连碱对l-名字致高血压大鼠胸主动脉舒缩功能的影响 中药黄连是黄连科植物的干燥根茎。它是传统医学中使用的一种长期清热解毒药物，具有清热、除湿、解毒、清火的功效。现代研究表明,黄连具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗糖尿病等作用。黄连中含有大量活性化合物,包括小檗碱、黄连碱、表小檗碱等多种异喹啉生物碱类化合物。有文献报道,黄连碱可以通过将血管平滑肌细胞阻滞在G1期而发挥抗细胞增殖作用;但其对高血压动物血管功能的研究尚未有报道。为了探讨黄连碱对血压以及血管功能的影响,本研究利用NO合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)诱导的大鼠高血压模型,考察黄连碱对高血压大鼠的降压作用及其对L-NAME诱导高血压大鼠血管功能的影响。 1 材料和方法 1.1 化学试剂和仪器 L-NAME、去甲肾上腺素(NE)、乙酰胆碱(ACh)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、二丁酸佛波醇酯(PDBu)等购自美国Sigma公司;硝普钠(SNP)购自北京化学试剂公司;黄连碱由中国医学科学院药物研究所秦海林老师课题组提供。BP-98A小动物无创尾压测定仪购自日本Softron公司;BL-420S生物机能实验系统购自成都泰盟科技有限公司。其余试剂均为市售分析纯。 1.2 实验动物 SPF级120～140 g Wistar ♂鼠,购自北京维通利华实验动物有限公司[合格证编号 SCXK(京)2006-0009]。 1.3 动物分组及给药方案 取大鼠79只,随机抽取15只作为正常对照组,其余作为高血压模型组。模型组大鼠按每只每天40 mg·kg-1灌胃L-NAME,正常组每天给予同等剂量蒸馏水。到L-NAME造模第3周时,测定大鼠尾动脉血压,选择SBP大于18.67 kPa的动物(共54只)作为造模成功的高血压大鼠进行后续研究。 动物分组:除正常组外,模型动物随机分为模型组(15只)、黄连碱低剂量组(12只)、黄连碱中剂量组(14只)、黄连碱高剂量组(13只)。黄连碱低、中、高剂量组大鼠每只每天分别灌胃给予黄连碱10、30、100 mg·kg-1;连续给药6周,期间每周测定一次给药干预1 h后的血压和心率。此外,除正常对照组给予同等剂量的生理盐水外,其余各组大鼠每只每天继续给予40 mg·kg-1的L-NAME。 1.4 kh液冲洗及血管张力检测 大鼠断头处死后,迅速分离胸主动脉并小心清除周围脂肪及结缔组织,剪取2段长约3 mm的血管环,悬挂于内盛10 ml K-H液(mmol·L-1:NaCl 120,KCl 4.7,KH2PO41.2,NaHCO325,glucose 11.1,CaCl22.5,MgSO41.2)、37℃恒温的浴槽中,充以95% O2和5% CO2的混合气体。调节血管环的初始张力至1.2 g,平衡1 h,期间每隔20 min用预温至37℃的K-H液换液1次。随后给予两次80 mmol·L-1KCl刺激,记录KCl引起的最大收缩值。用K-H液冲洗至血管张力回到基线后进行下一步实验。 给予一段血管环累积浓度的NE(10-9～10-5mol·L-1,浴槽内的终浓度,以下均同)刺激,观察血管对NE的收缩反应性。用KH液冲洗数次后,平衡20 min,向浴槽中加入NE(10-6mol·L-1)使血管收缩达到平台后再加入10-10～10-5mol·L-1的ACh,观察血管依赖内皮的舒张反应。用KH液冲洗后,换成无钙KH液平衡20 min(中间每隔5 min换一次新鲜无钙KH液),加入NE(10-6mol·L-1),随后再加入80 mmol·L-1的KCl以及0.1～2.5 mmol·L-1的CaCl2。 给予另一段血管环累积浓度的KCl(10～80 mmol·L-1)刺激,观察血管对高钾的收缩反应性。用KH液冲洗至血管张力回到基线后加入AngⅡ(10-7mol·L-1);冲洗后平衡20 min,加入NE(10-6mol·L-1)预收缩血管后再加入10-10～10-5mol·L-1的SNP,观察不依赖内皮的血管舒张反应。用KH液冲洗两次,平衡20 min后再加入PKC激动剂PDBu(10-7mol·L-1)。 1.5 ach和snp的扩张反应,为ach、snp的表达提供了依据 血管收缩反应性以绝对张力值与高钾(80 mmol·L-1)刺激引发的最大收缩张力值的百分比表示;血管对ACh和SNP的舒张反应以胸主动脉舒张张力值占10-6mol·L-1NE引起收缩张力值的百分比表示。实验数据采用SPSS 13.0软件进行统计学处理,数据以xˉ±sxˉ±s表示,组间比较采用One-way ANOVA检验。 2 结果 2.1 对大鼠sbp、心率的影响 给药前,模型组与黄连碱低、中、高3个剂量组的SBP分别为(20.13±0.40) kPa、(20.80±0.53) kPa、(20.