超高效液相色谱串联质谱法测定水产品中喹乙醇及其代谢物3-甲基-喹啉-2-羟酸.docxVIP

超高效液相色谱串联质谱法测定水产品中喹乙醇及其代谢物3-甲基-喹啉-2-羟酸 氨基乙醇是氨基乙醇类动物的抗菌药物，具有促进生长、提高饲料效率和广泛抗菌性。研究结果表明喹乙醇及其代谢物3-甲基-喹噁啉-2-羟酸(见图1~2)会在动物体内产生残留,进而形成对人体的危害,我国也已出台相应的政策、法规及测定标准,禁止其用于食用动物[2~4]。因此为保障食品安全,有必要对喹乙醇及其代谢物的检测方法进行研究。目前,有不少有关喹乙醇的高效液相色谱-串联质谱法检测方法的研究报道[5~6],但未见利用超高效液相色谱串联质谱快速检测喹乙醇及其代谢物的研究报道,本研究建立了水产品中喹乙醇及其代谢物的快速检测方法,该方法快速准确、灵敏度高,非常适合水产品中喹乙醇及其代谢物的快速确证分析。 1 材料和方法 1.1 -甲基羟基羟基 喹乙醇,含量99.0%,德国Dr.Ehrenstorfera公司;3-甲基喹噁啉-2-羧酸,含量94.0%,德国Dr.Ehrenstorfera公司。乙酸铵、盐酸、甲酸、乙腈、甲醇、乙酸乙酯均为色谱纯,三氯乙酸、正己烷、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠为分析纯。 1.2 水质、浓缩站、混合器、预压机 Waters UPLC超高效液相色谱仪、API 4000Q trap三级四级质谱仪;Zymark Turbo Vap?LV浓缩站;IKA MS 3 basic微型混合器;水浴恒温振荡器等实验室常用设备。 1.3 样品前处理 1.3.1 样品的提取 准确称取均质后的试样5 g,精确到0.01 g,置于50 m L聚丙烯离心管中,加入5 g中性氧化铝和20 m L乙酸乙酯+乙腈(1+1,V/V)混合溶液,振荡提取15 min后5000 r/min离心5 min,取上清液转入另一支50 m L离心管中,样品重复提取一次,合并提取液,加入10m L正己烷,振荡5 min,5000 r/min离心5 min。取下层清液于45℃吹氮浓缩至近干,用1 m L流动相溶解残渣,过0.22μm微孔滤膜,待测。 1.3.2 提取材料的制备 准确称取2 g试样,精确到0.01 g,置于50 m L离心管中,加入15 m L乙酸乙酯,旋涡混匀,振荡15 min,4000 r/min离心5 min,取上清液转入另一支50 m L离心管中,再用15 m L乙酸乙酯提取一次,合并上清液于同一离心管中。往样品残渣中加入0.1 mol/L磷酸盐缓冲液10m L,旋涡混匀,振荡15 min,8000 r/min离心10 min,取上清液合并到离心管中,振荡15 min,6000r/min离心5 min,取下层溶液至50 m L具塞离心管中。加入盐酸200μL,混匀,再加入乙酸乙酯8 m L,振荡15 min,8000 r/min离心10 min,上层溶液转入玻璃试管中,再用8 m L乙酸乙酯重复提取一次,合并上层溶液于同一玻璃试管,55℃吹氮浓缩至干,用1 m L流动相溶解残渣,过0.22μm微孔滤膜,待测。 1.4 测量 1.4.1 溶剂a和乙酸铵溶液 色谱柱:UPLC ACQUITY BEH C182.1×100 mm,1.7μm,流动相:溶剂A是含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸铵溶液,溶剂B为乙腈,梯度洗脱,在0至3 min内溶剂A体积分数从90%线性减少到40%,在3至4 min内溶剂A体积分数从40%线性增加到90%然后保持1 min,流速0.3 m L/min,柱温30℃,进样量10μL。 1.4.2 气体离子检测 离子源:电喷雾离子源(ESI);扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应选择离子检测;电喷雾电压:5500 V;雾化气:60 MPa,气帘气:20 MPa,辅助加热气:70 MPa;碰撞气:Medium,四种气体均为氮气;离子源温度:550℃;碰撞能量、去簇电压见表1。 2 结果与讨论 2.1 分析子离子峰,优化去簇电压 将1μg/m L标准溶液用蠕动泵以5μL/min的流速连续注射入质谱仪,在正离子模式下先进行一级质谱分析(Q1扫描),得到准分子离子峰(M+1)即m/z264.2、m/z 189.2,优化去簇电压。对m/z 264.2、m/z189.2进行二级质谱分析,得到碎片离子信息,优化碰撞电压,然后对离子源温度、雾化气、气帘气等进行优化。再以多反应监测(MRM)正离子模式优化去簇电压、碰撞电压、碰撞室入口及出口电压等质谱参。分别选择丰度较强的2个子离子为特征离子,以母离子与子离子组成监测离子对,进行定性和定量分析。 2.2 质谱条件的选择 对色谱柱的选择,比较了BEH C182.1×100 mm、1.7μm与XDB-C182.1×100 mm、3.5μm。用BEH C182.1×100 mm、1.7μm分离,各组分的出峰时间、分离度和峰形较好