改良克氏双糖铁培养基使用说明书.docVIP

改良克氏双糖铁培养基使用说明书 产品名称: 改良克氏双糖铁培养基 英文名称： Kligler Iron Agar 产品规格： 5ml*20支/盒 贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。 产品用途： 生化培养基，用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的生化反应筛选 原 理： 蛋白胨、酵母浸膏提供氮源、维生素、矿物质;山梨醇、葡萄糖提供可发酵糖类;硫代硫酸钠可被某些细菌还原成H2S，与铁离子生成黑色硫化铁;酚红是pH指示剂，发酵糖产酸变黄，产碱变红;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。 改良克氏双糖铁使用方法： 1、称取改良克氏双糖铁65g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管(装量宜多，得到较高的底层)。121℃高压灭菌15min。 2、将灭菌后的试管制成高层 3、挑取CIN-I和改良Y培养基上的可疑菌落，穿刺接种后再划斜面，置培养26℃培养24h。 4、观察结果。斜面和底部皆变黄者做进一步的生化鉴定。 培养基配方(每升)： 蛋白胨 20.0g 酵母浸膏 3.0g 山梨醇 20.0g 葡萄糖 1.0g 氯化钠 5.0g 柠檬酸铁铵 0.5g 硫代硫酸钠 0.5g 琼脂 12.0g 酚红 0.025g zui终pH7.4±0.2 质量控制: 常见问题: 克氏双糖铁琼脂的原理和使用方法。 克氏双糖铁琼脂常用于观察微生物发酵葡萄糖和乳糖的能力，只用KIA一种就可以把肠杆菌科细菌和其他科细菌区别出来。 克氏双糖铁琼脂成分中含有葡萄糖和乳糖，二者比例为 1：10， 指示剂为酚红，其在PH6.8时变为黄色，而克氏双糖铁琼脂的PH为7.4，产少量的酸就可导致颜色变化。 生化原理： 斜面部分暴露于空气中，为有氧环境。而下部与空气隔绝是相对厌氧的环境。因此配克氏双糖铁琼脂时，最重要的是斜面部分和管下部琼脂的长度，两者均为3cm，以保证两部分相对应的有氧或厌氧环境。 用针穿刺时，取单个菌落，穿刺至底部3-5mm处，然后在斜面上往复划线。放35度培养18-24小时。 观察结果：有三种类型 A、非发酵型：无碳氢化合物发酵，所以无酸产生，斜面上琼脂的肽降解产物是碱性物质导致斜面变红。这种类型的细菌称为非发酵型。 B、非乳糖发酵型:如果接种的是发酵葡萄糖不发酵乳糖的细菌，培养基内仅有0.1%葡萄糖可以产酸。开始阶段，培养8-12h时，产生的酸足以引起斜面和底部颜色变成黄色。在接下来的时间里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分的细菌在有氧条件下开始氧化降解氨基酸，产生的胺类很快就中和斜面上存在的酸；到18-24h，整个斜面又转换成碱性PH，颜色有变成红色。深部（厌氧区域），氨基酸降解不足以中和形成的酸，培养基仍为黄色。 C、乳糖（蔗糖）发酵型