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鹰嘴豆豆叶和豆茎中总多糖的测定 鹰嘴豆是布尔医学中常用的药物。维吾尔族用它治疗支气管炎、黏膜炎、霍乱、便秘痢疾、消化不良、肠胃气胀、毒蛇咬伤、糖尿病、性欲降低、皮肤瘙痒、高脂血症、中暑等疾病。在中医上, 鹰嘴豆可以调节湿度, 有止泻、解毒、壮身等作用, 它的花可以治疗痢疾, 浸泡水后服用可以治疗中药中毒和白带增多等。籽粒可做利尿剂、催奶剂, 可治疗失眠、预防皮肤病等。 多糖广泛存在于自然界, 是多种中草药的有效成分之一, 具有多种生物活性, 是理想的免疫增强剂。能提高机体免疫系统的功能, 对正常细胞没有毒副作用, 在抗肿瘤, 抗病毒, 抗衰老等药物研究中, 多糖类药物的研制已成为当今世界新药的开展方向之一。多项研究已经充分表明多糖无毒副作用, 来源广泛, 生物活性高, 必将为高效低毒药物开发开辟广阔的前景。 鹰嘴豆的食用及药用价值已经受到广泛的关注, 鹰嘴豆中各种成分的分析已经做得很详细, 但是豆茎、豆叶、豆荚中的成分分析没有见到报导。本次课题的研究目的是利用分光光度法的检测技术, 检测鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚中总多糖的含量, 为鹰嘴豆的全面开发利用提供科学依据。 1 样品的分析纯 分光光度计, 蒽酮、浓硫酸、95%乙醇、无水乙醇、氯仿、正丁醇均为分析纯, 鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚样品 (2009年采于新疆木垒) 。 2 方法和结果 2.1 运移法浓缩运热法 分别称取干燥至恒重过40目筛的鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚粉末100g, 加水适量, 于95℃时超声提取30min, 过滤, 滤渣于95℃时再超声提取30min, 共提取3次, 合并提取液, 于旋转蒸发仪上浓缩至100ml。在其中加95%乙醇至含醇量达80%, 4℃时静置过夜。40000r/min下离心分离, 离心后的沉淀物加少量热水溶解后, 再加95%乙醇至含醇量达80%, 静置过夜, 离心分离。将得到的粗多糖溶于热水, 用Sevag法 (氯仿∶正丁醇=4∶1) 除蛋白8次。加1%活性炭脱色, 抽滤, 加入乙醇使含醇量达80%, 静置过夜, 离心分离。沉淀物置于60℃的真空干燥箱中干燥, 即得精制的淡黄色的鹰嘴豆豆茎, 豆叶多糖。将精制后的多糖在260nm～280nm区间扫描, 结果显示无吸收峰, 说明蛋白基本除尽。 2.2 标准溶液的制备 精密称取葡萄糖对照品0.1000g, 用蒸馏水溶解并定容至100ml, 配成浓度为1mg/ml的标准储备液。 2.3 回归方程 精密吸取葡萄糖标准溶液0.0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5ml于10ml的容量瓶中, 用蒸馏水定溶至刻度。分别取2.0ml至25ml具塞试管中, 加蒽酮-浓硫酸 (0.2g∶100ml) 试剂4ml, 放入沸水中加热8min, 迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度。用吸光度对浓度回归, 得回归方程:A=0.0294C-0.0325, r=0.9996。线性范围为3.333～166.7μg/ml。 2.4 多糖含量的测定 精密称取精制的多糖0.1000g, 用少量热蒸馏水溶解后定溶于100ml容量瓶中, 摇匀。精密吸取此溶液2ml至25ml具塞试管中, 加蒽酮-浓硫酸试剂4ml, 放入沸水中加热8min迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度, 根据标准曲线计算浓度, 再按下式计算换算因子: f=W/CD 式中W为多糖质量 (mg) , C为多糖的浓度 (μg/ml) , D为稀释因素。 得豆茎:f=6.265 豆叶:f=4.608 豆荚:f=3.216。 2.5 多糖含量的测定 分别准确称取鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚粉末0.5g (4份) , 置于100ml容量瓶中, 加水适量, 在95℃时超声提取30min, 过滤于另一100ml容量瓶中, 滤渣用蒸馏水洗涤多次, 用水定溶至刻度。精密吸取样品溶液2.5ml置25ml容量瓶中, 加水稀释刻度。精密吸取此溶液2.0ml置于25ml具塞试管中, 加入蒽酮-浓硫酸试剂4m, 放入沸水中加热8min, 迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度。 含量 (%) =CDf/W×100% 式中W为多糖质量 (mg) , C为多糖的浓度 (μg/ml) , D为稀释因素, f为换算因子。 鹰嘴豆豆茎多糖的平均含量为11.4% (n=4) , RSD= 1.3%。 鹰嘴豆豆叶多糖的平均含量为12.6% (n=4) , RSD= 1.1%。 鹰嘴豆豆荚多糖的平均含量为8.7% (n=4) , RSD= 0.98%。 2.6 浓硫酸溶液法 分别精密吸取对照品溶液1.0ml, 于25ml具塞试管中, 加1.0ml蒸馏水, 加入蒽酮-浓硫酸试剂4m, 放入沸水中加热8min, 迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度。求的其RSD分别为:0.83%;0.97%;1.1% (n=