干细胞与iPS技术培训课件.pptVIP

;Lucas Cranach, 1472-1553;自然界中生物的再生现象;20世纪初，遗传学家Thomas Morgan利用涡虫〔flatworm, Planaria〕为材料研究过再生问题。研究说明切割下来的组织块小到涡虫虫体的1 /279时仍然能够再生出一条小涡虫。因此,涡虫又被誉为“切不死的动物〞。他将这个过程称为变形再生〔morphallaxis〕。 再生组织是由伤口处已分化细胞的去分化衍生而来,还是来源于称为全能干细胞的neoblasts(未分化细胞) ,这是一个长期争论不休的问题。;后来研究发现，在涡虫体内有一种散布在全身，好似没什么功能的非常小的细胞，它们就是干细胞。 涡虫的干细胞能够转变成“其他任何种类的细胞〞，具有这种性质的细胞在生物学上被称为“全能干细胞〞 。 ;第一节 干细胞;二.干细胞特性及分类 ;; ; 缓慢性 ;3，干细胞的分化特点 1〕. 多潜能性 ;;;〔1〕去分化 一种干细胞向其前体细胞的逆向转化的过程。 〔2〕转分化〔transdifferentiation〕 一种组织类型的干细胞在适当条件下分化为另一种组织类型细胞的过程。 ?例一：将成年雄性小鼠的造血干细胞移植到雌鼠体内，3天后在雌鼠的神经胶质细胞中检测到 Y 染色体的存在，证明成体动物的造血干细胞可转分化成为神经胶质细胞。;;〔二〕干细胞的别离与纯化 1.通过干细胞外表的标记分子进行 造血干细胞标记物为CD34＋等；神经干细胞的巢素蛋白。 2.通过干细胞不同于一般分化细胞的物理特性进行 干细胞不被Hoechst33342和Rhodamine123染色。;三，干细胞的分类;;;〔一〕胚胎干细胞;胚胎干细胞的概念;胚胎干细胞的生物学特性;;;;〔三〕人胚胎干细胞的来源与鉴定Human Embryonic Stem Cell ;a.取自体外受精胚胎囊胚期内细胞群。;b.取自终止妊娠的胎儿的性器官组织。 ;c.通过体细胞核转移技术〔克隆技术〕获得;2.克隆技术; 先前一直认为，高等动物的细胞分化是一个不可逆的过程，因此无法利用已分化的动物细胞进行克隆的。 英国剑桥大学的约翰?戈登教授首先通过实验研究从理论上证明了动物细胞重新编程是完全有可能的，1962年，他通过实验把青蛙肠上皮的细胞的细胞核移植进入去掉核的卵母细胞质中，并培育出成体青蛙。??一实验首次证实分化了的细胞基因组是可以逆转变化的，具有划时代的意义，并且为动物克隆实验奠定了根底，大名鼎鼎的克隆羊多利就是依照戈登所创造的方法被克隆出来的。;克隆羊Dolly的诞生;哺乳动物克隆技术的开展;轰动世界的黄禹锡造假事件;;黄禹锡东山再起;克隆人？; a 胚胎干细胞具有正常稳定的二倍体核型和带型。 b 胚胎干细胞具有较高的端粒酶活性及碱性磷酸酶的表达。 人胚胎干细胞系端粒酶活性都很高，说明其可在体外未分化状态进行长期培养。;c. 人胚胎干细胞特异外表抗原的表达;d. 具有转录因子Oct-4的表达;　 e.不被Hoechst33342 和Rhodamine123染色 f .能分化成三个胚层的细胞，将胚胎干细胞植入免疫缺陷小鼠皮下可产生畸胎瘤 g .可诱导分化为各种成体干细胞;胚胎干细胞的诱导分化： 　　胎牛血清，骨髓基质细胞共培养 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?造血细胞 　　　RA 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?神经细胞 　　　　　　DMSO 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?肌肉细胞 　　　　TGF-B1, VEGF, bFGF 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－?血管和内皮细胞 　　　　　RA+胰岛素+T3 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?脂肪细胞 　　　　　BMP-2, BMP-4 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?软骨细胞 　　　　地塞米松，磷酸甘油 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?骨细胞 　　　　　基因转染 胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－?胰岛素分泌细胞;〔二〕成体干细胞;科学家鉴定或别离出多种成体组织的干细胞， 造血干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞等等。; 实际上，克隆羊Dolly的诞生就已经证明，通过体细胞核移植实验实现哺乳动物体细胞的重编程是可能的，将已分化细胞的细胞核植入卵细胞内可以使已分化细胞基因组中处