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大鼠糖尿病膀胱病模型的建立 糖尿病性神经源性膀胱（dnb）也称为糖尿病性膀胱功能障碍（dnb）。糖尿病样胆（cdp）显示糖尿病引起的周围神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢神经末梢功能障碍，导致严重的尿潴留、尿失禁和慢性肾功能衰竭。严重影响患者的日常生活和工作。80%的糖尿病患者可并发此症, 即使经治疗控制了高血糖症, 仍有25%的患者存在DNB。目前DNB的发病机制研究是热点, 多数集中在动物研究上面, 所以, 复制一种稳定可行的糖尿病膀胱病模型对于研究糖尿病神经源性膀胱发病机制尤为重要。目前最常见的是采用链脲佐菌素 (streptozotocin, STZ) 复制大鼠糖尿病模型, 但应用STZ复制稳定的大鼠糖尿病神经源性膀胱模型的报道较少, 为此, 笔者一次性腹腔注射大剂量STZ诱导SD大鼠糖尿病神经源性膀胱模型, 现报道如下。 1 材料和方法 1.1 许可证号:scxk-stz 实验动物为清洁级SD大鼠, 购自广东省医学实验动物中心, 许可证号:SCXK (粤) 2008-0002;STZ (美国Sigma公司) ;柠檬酸、柠檬酸钠、罗氏卓越型血糖仪及血糖试纸、尿动力仪及微量灌注泵 (美国Laborie公司) 。 1.2 动物分组及分组 实验动物适用性喂养1周后, 将55只SD大鼠 (雌雄不拘, 体质量200~250 g) 随即分为实验组和对照组, 实验组45只, 对照组10只, 实验组动物再分为A、B、C 3组, 每组各15只。空腹12 h后, 检测尾静脉空腹血糖, A、B、C组分别一次性左腹腔注射50、60和70 mg/kg的STZ (用p H=4.2的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲溶液1︰1配制成10 mg/m L的溶液) , 对照组动物注射等量的p H=4.2柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液, 单笼单只喂养, 保证足够摄食和饮水, 动物房每日灯光照射12 h, 湿度40%~70%, 温度20~25℃。 1.3 阴道织物上的压力-容积关系 (1) 观察动物的摄食、饮水、尿量、精神状态、皮毛光泽度, 在0、2、4、6和8周分别记录实验组A、B、C组和对照组动物的体质量变化及尾静脉空腹血糖情况。 (2) 8周后检测对照组和空腹血糖≥16.9 mol/L的实验各组大鼠的尿流动力学:各组大鼠用戊巴比妥钠 (35 mg/kg) 腹腔注射麻醉, 以硬膜外导管经尿道插入膀胱, 导管经三通管与尿动力仪及微量灌注泵相连, 轻压腹部, 排空膀胱尿液, 用生理盐水以0.2m L/min的速度灌注膀胱。根据膀胱充盈过程中压力-容积关系, 大鼠膀胱充盈分为压力升高缓慢的低压充盈期和压力升高较快的高压充盈期。参照大鼠不稳定膀胱 (DI) 的判断标准, 在膀胱低压充盈期出现膀胱内压升高超过15 cm H2O (1 cm H2O=0.988 k Pa) 的逼尿肌收缩时即为不稳定膀胱。 (3) 检测完尿流动力学后, 取完整膀胱, 10%甲醛固定, 浸蜡, 包埋切片, 常规苏木精-伊红染色, 光镜下观察逼尿肌纤维排列、肌细胞形态结构等。 (4) 造模成功定义:8周后空腹血糖≥16.9 mol/L且尿流动力学检查为逼尿肌收缩功能减弱, 残余尿增多, 最大膀胱容量增大, 膀胱病理切片显示逼尿肌纤维排列紊乱, 肌细胞肥大。 1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0软件进行数据处理, 所有结果以均数±标准差 (ue0af±s) 表示, 进行方差分析、t检验以及χ2检验, 以P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 tz前后糖尿病并发症的变化 对照组大鼠正常饮食, 体质量增加, 血糖无明显波动;实验组大鼠注射STZ后3 d, 开始出现烦渴多饮、多食、多尿的典型糖尿病症状, 4周时皮毛变得暗淡无光泽, 6周时精神萎靡、皮毛稀疏;8周时体质量明显减轻, 尾静脉空腹血糖明显升高, 均≥16.9mol/L。各组血糖见表1。 2.2 结果的尿流动力学 与对照组比较, 实验各组大鼠最大膀胱容量增大, 最大膀胱内压降低, 残余尿增多, 膀胱顺应性增高。见表2及图1。 2.3 尿肌纤维排列形态 对照组膀胱病理切片常规HE染色 (见图2A) 示膀胱逼尿肌纤维排列规整, 肌细胞大小及形态正常, 而实验A组 (见图2B) 、B组 (见图2C) 、C组 (见图2D) 膀胱逼尿肌纤维排列紊乱, 肌细胞肥大, 形态各不相同。 2.4 成膜率及存活率测定 实验A组 (低剂量) 存活率高, 但成膜率偏低;实验C组 (高剂量) 成膜率及存活率均较低;而实验B组 (中间剂量) 成膜率及存活率均较高。见表3。 3 关于自发缓解的问题 STZ是一种对胰腺β细胞起选择性破坏作用的药物, 一次性腹腔注射大