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斐林滴定法测DE值 原理：淀粉酶将淀粉水解成短链的糊精及少量的葡萄糖。 斐林试剂由甲乙液组成，甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸甲钠溶液。平时甲、乙液分别储存，测定时才等体积混合，混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀。 生成的氢氧化铜与酒石酸甲钠反应，生成酒石酸甲钠与铜的络合物，使氢氧化铜溶解： 酒石酸甲钠铜络合物中的二价铜是一个氧化剂，能使还原糖氧化，而二价铜被还原成一价的红色氧化亚铜沉淀 剩余的二价铜在酸性条件下与碘化钾反应，生成碘，用硫代硫酸钠滴定，I2被还原成I-，随着其缓缓加入，颜色由棕黄色逐渐变为黄色，当呈现淡黄色时，加入2%的淀粉指示剂，缓慢滴加硫代硫酸钠直至溶液中的蓝色消失，为浅粉色，即为滴定终点。 通过这个反应，能够测量存在于淀粉水解物中的还原糖含量。用纯水代替样品与斐林试剂反应，所消耗硫代硫酸钠的体积为空白值。 定义：葡萄糖当量浓度（DE）代表淀粉水解的程度，是以葡萄糖计算的还原糖含量占干物质的百分率，其数值的大小与淀粉水解的程度成正比。 详述： 参数 详述 应用范围 测定液化液及糖化液中的还原糖含量 灵敏度 无 检测限 样品溶液中还原糖量低于1%（W/V） 内容：这个SOP包括以下几部分： 试剂，底物的配制 过程 版本的更新及相关信息 试剂、底物的配制： KI、I2、H2SO4、Na2S2O3·5H2O、Milli-Q Water 试剂： 试剂 配制方法 有效期 斐林试剂：甲液 69.3g CuSO4.5H2O溶解在大约600ml Milli-Q水中，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定溶至刻度线。 6个月 斐林试剂：乙液 346g C4H4O6KNa.4H2Oand100g NaOH溶解在大约800ml Milli-Q水中，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定溶至刻度线。 6个月 30%（W/V）KI溶液 300g KI溶解到800ml Milli-Q水中，加3ml 1N NaOH，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定溶至刻度线，放在棕色试剂瓶中保存。 6个月 26%硫酸溶液 放置大约750ml Milli-Q水于一个1L的烧杯中。戴上手套和防护眼镜。在连续搅拌的状态下，非常缓慢的加入145ml 96%的硫酸，搅拌至溶液变凉，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定溶至刻度线。 6个月 0.1N硫代硫酸钠溶液 溶解25g Na2S2O3.5H2O和0.2g Na2CO3在500ml预先煮沸并冷却的水中，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定溶至刻度线，储存在棕色试剂瓶中。 6个月 葡萄糖标准溶液的配制： 1%葡萄糖标准溶液：称1.000g无水葡萄糖于80mlMilli-Q水中搅拌溶解，将其转移到100ml容量瓶中，用水定溶至刻度线。 样品的配制：糖化液样品称0.1-0.2g，液化液样品称1.0g，溶解到Milli-Q水中，使样品与水的总重为25.0g。 仪器设备：碱式滴定管、250ml三角瓶、分析天平、折光仪、冰浴、电炉 过程： 调节电炉加热功率，使45ml 25℃ 水空白值的测定：加入25ml的Milli-Q水，10ml斐林试剂甲液，10ml斐林试剂乙液于250ml三角瓶中。 混匀后，放在电炉上加热，沸腾2分钟后，放在冰浴中将其迅速冷却至30℃ 加入10ml 30% KI和10ml 26% H2SO4，混匀后用0.1N Na2S2O3滴定。滴定过程中不断的摇匀，随着硫代硫酸钠的缓缓加入，颜色由棕黄色逐渐变为黄色，当呈现淡黄色时，加入2%的淀粉指示剂，缓慢滴入硫代硫酸钠直至溶液蓝色消失，为浅粉色，即为滴定终点。 记录消耗硫代硫酸钠的体积，即为空白滴定值。 3.标准葡萄糖溶液的滴定：加入20ml的Milli-Q水，5ml 1%葡萄糖溶液，10ml斐林试剂甲液、10ml斐林 试剂乙液于250ml三角瓶中。 混匀后，放在电炉上加热，沸腾2分钟后，放在冰浴中将其迅速冷却至30℃ 加入10ml 30% KI和10ml 26% H2SO4，混匀后用0.1N Na2S2O3滴定。滴定过程中不断的摇匀，随着硫代硫酸钠的缓缓加入，颜色由棕黄色逐渐变为黄色，当呈现淡黄色时，加入2%的淀粉指示剂，缓慢滴入硫代硫酸钠直至溶液蓝色消失，为浅粉色，即为滴定终点。 记录消耗硫代硫酸钠的体积，即为标准葡萄糖滴定值。 液化液，糖化液DE的测定： 称0.2g的糖化液（或液化液1.0g）到250ml三角瓶中，用移液枪加24.8ml（或24ml）Milli-Q 加入10ml斐林试剂甲液、10ml斐林试剂乙液于250ml三角瓶中。 混匀后，放在电炉上加热，沸腾2分钟后，放在