风干牦牛肉中敌百虫残留量的LLE-GC-MS检测方法研究.docxVIP

? ? 风干牦牛肉中敌百虫残留量的LLE-GC-MS检测方法研究 ? ? 黄伊嘉，唐善虎，李思宁 （西南民族大学生命与科学技术学院，四川成都610041） 风干牦牛肉是我国民族地区特色产品，因其天然原味，深受消费者喜爱。然而，由于制作工艺传统、生产方法局限，我国大多数传统的腌制肉类产品仍然处在缓慢发展的低层次阶段。因而受经济利益的驱动，部分用于防腐、除虫和灭鼠的农药被投入到生产过程中[1-2]。敌百虫（C4H8O4Cl3P）是一种在渔业和畜牧业的生产中应用比较广泛的重要杀虫剂，作为有机磷酯类化合物，它具备残留低、毒性小和效率高等特点，对线虫、吸虫类等的杀灭收效良好[3-4]。但敌百虫在哺乳动物的繁殖及其脑干神经细胞存在明显的毒副作用，这在最近几年就有确切的证据显示[5]。若食品中添加敌百虫进入人体，会伤害器官功能，遗传物质会因此发生改变。卫生部2011年发布了《食品中可能违法添加的非食用物质名单》，明确规定在火腿、腊肉、咸鱼等制品中禁止添加敌百虫[6]。然而，我国现有食品安全标准并未针对风干牦牛肉中敌百虫的残留量做出限量要求。因此，开展风干牦牛肉中敌百虫残留量的检测方法研究意义重大。 目前，检测农产品中敌百虫残留的方法有红外光谱法[7]、分子印迹法[8-9]、电化学法[10-11]、生物传感技术[12-14]和色谱法等。其中研究较多、应用较广泛的主要是色谱法，检测样本包括水样、植物、水产品和动物制品等[15]。动物源性食品的国家标准中对敌百虫的检测提出了液相色谱-质谱/质谱法[16]，该方法具有灵敏度高、适用性广、选择性好等优点，但对仪器和操作人员的水平要求较高，不具有普遍推广性。对于动物源性样品的净化，主要是采用凝胶渗透色谱法（gel permeation chromatography、GPC）和液液萃取法（liquid-liquid extraction、LLE）两种净化方式[17]。虽然GPC技术先进，但溶剂消耗量大，仪器昂贵且运行成本高，一般试验室不具备配备条件。因此，本研究将参考已有相关方法，通过一系列试验筛选确定最佳前处理方法和仪器分析条件，建立一种使用液液萃取-气相色谱质谱联用法测定风干牦牛肉中敌百虫残留量的新检测方法，达到准确、便捷、高效的分析要求。 1 材料与方法 1.1 试剂 敌百虫标准物质：纯度＞98%，德国DR.E公司；无水硫酸钠（分析纯）：在650℃灼烧4 h后贮于干燥器备用，天津市科密欧化学试剂有限公司；乙酸锌（分析纯）：西陇化工股份有限公司；乙酸乙酯（色谱纯）：成都市科隆化学品有限公司；乙腈（色谱纯）：美国TEDIA公司；试验用水为超纯水。 1.2 仪器设备 7890A-5975C气相色谱-质谱联用仪：美国Agilent公司；FJ-200可调高速均质机：常州市金坛大地自动化仪器厂；R-215旋转蒸发仪：瑞士BUCHI公司；5804高速离心机：德国Eppendorf公司；ML204电子分析天平：瑞士Mettler Toledo公司；50mL离心管：美国Thermo Fisher公司；250 mL分液漏斗、三角漏斗、浓缩瓶：天津市天科玻璃仪器制造有限公司；0.20 μm的有机相针头滤膜：天津市津腾实验设备有限公司。 1.3 气相色谱-质谱（gas chromatographic-mass spectrometric，GC-MS）条件 1.3.1 色谱条件 色谱柱采用HP-5MS毛细管柱 [30 m×0.25 mm×0.25μm（膜厚）]，载气为高纯氦气，恒流（流速1mL/min），进样量为2 μL，进样口温度在一定范围内（200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300 ℃） 逐渐升高，进样方式分别选择不分流和脉冲不分流两种，柱箱升温程序采用8种不同保持时间组合（3个阶段温度分别为：50、170、200℃）。 1.3.2 质谱条件 EI源，轰击电压70 eV；离子源温度230℃，四极杆温度150℃，辅助接口温度260℃；采集模式：全扫描和选择离子监测（selected ion monitor，SIM）；扫描范围：50 amu～550 amu；溶剂延迟：根据出峰时间确定。特征选择离子见表1。 表1 特征选择离子和定量离子Table 1 Feature selection ions and quantitative ions 1.4 试验方法 1.4.1 样品制备 取一定量（250 g左右）的风干牦牛肉样品切成小块，取样方法采用四分法。所取的样品平均分成2份，1份用于试验测定，另1份放置于冰箱中保存，备用。在组织捣碎机中粉碎待测样品成匀浆或均匀粉状[18]。 1.4.2 样品提取 称取样品5.0 g、乙酸锌0.5 g，加入50 mL离心管中，再加入一定浓度（水