面粉中霉菌和酵母计数能力验证结果分析.docxVIP

? ? 面粉中霉菌和酵母计数能力验证结果分析 ? ? 能力验证（Proficiency Testing）是利用实验室间比对来判定实验室和检查机构检测能力的活动，是检验实验室检测水平的一项重要手段。实验室通过参加能力验证活动，不仅可以清楚了解本机构实验室的检测能力和水平，考察检验人员的技术水平和设备的性能，还可以从外部寻找与同行之间的差异，发现自身存在的不足，及时有效地提出改进措施，持续改进和完善实验室的质量控制和管理[1-2]。 霉菌和酵母属于真菌，在食物中繁殖速度非常快，会产生大量的毒素，对人体造成致命性的危害。例如，黄曲霉毒素就是由黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的双呋喃环类毒素，黄曲霉毒素已被世界卫生组织癌症研究机构划定为一类天然存在的致癌物[3]。花生、花生油、玉米等食品中极易受到黄曲霉毒素的污染。同时，霉菌和酵母也是评价食品卫生质量的指示菌，已成为食品中常规的检测项目之一[4]。目前，《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》（GB 4789.15—2016）是普遍采用的霉菌和酵母检验方法，该方法操作简单，但由于霉菌和酵母自身繁殖特点，前期生长缓慢，后期急剧生长，蔓延生长甚至连片，导致计数时比较困难，因此霉菌和酵母计数也是考察实验室和检测人员技术水平的重要参考。 1 材料与方法 1.1 样品 本次能力验证样品由中国食品药品检定研究院提供，2份待测样品，每份样品包含装有菌球的西林瓶1瓶（规格：1粒/瓶）和相同编码的面粉1袋（规格：25 g/袋），2份样品的编号分别为TT 1.2 培养基及试剂 孟加拉红琼脂，北京陆桥技术股份有限公司；0.85%无菌生理盐水，北京陆桥技术股份有限公司。 1.3 仪器设备 无菌均质器S-154，上海德记行科技发展公司；MJ-250BSH-Ⅲ型霉菌培养箱S-01，上海新苗医疗器械制造有限公司。 1.4 实验方法 1.4.1 样品处理 在生物安全柜内打开装有霉菌和酵母菌球的西林瓶，并将霉菌和酵母菌球加入到盛225 mL 0.85%无菌生理盐水的无菌均质袋中，充分均质混匀。再将与西林瓶相同编码的面粉基质加入到上述生理盐水中，充分均质混匀，作为1∶10的样品匀液。 1.4.2 样品稀释 （1）吸取1∶10样品匀液1 mL，加入到盛有9 mL无菌生理盐水的无菌试管中，混匀，制成1∶100的样品匀液，依此法继续用无菌生理盐水进行10倍系列梯度稀释，制备1∶1 000的样品匀液。 （2）分别吸取各稀释级的样品匀液1 mL于无菌平皿内，每个稀释级做2个平皿。同时，分别取1 mL 0.85%无菌生理盐水加入到两个无菌平皿内作空白对照。及时将20～25 mL冷却至46 ℃的孟加拉红琼脂培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀，置水平台面待培养基完全凝固。 （3）培养。将上述凝固后培养基，正置平板，放置于28 ℃培养箱中培养至第5天，逐日观察并记录结果。 2 结果与分析 2.1 不同取样方式下霉菌和酵母的计数结果 面粉一般指小麦粉，即由小麦磨成的粉状物。面粉主要成分是淀粉，是不溶于水的，会形成悬浊液[5]，面粉在0.85%的无菌生理盐水中也不能完全溶解，会形成悬浊液，放置1～2 min面粉会下沉至底部，所以取样方式对检测结果会有一定影响。本实验设计两种取样方式。第一种是用无菌均质器均质1 min混匀后直接取悬浊液进行后续检测，第二种是用无菌均质器均质1 min混匀后放置1～2 min取上清液进行后续检测。从计数结果来看，第二种取样方式霉菌和酵母数均比第一种取样方式多，详见表1、表2。本实验选取第二种取样方式（上清液）的结果报数，TZ值为1.68，TZ值为0.66，两份样品|Z|值均小于2.0，|Z|值≤2为满意结果，故两份样品结果均为满意。 表1 T菌和酵母计数结果表 表2 T菌和酵母计数结果表 2.2 孟加拉红培养基上霉菌和酵母生长形态变化 孟加拉红琼脂培养基中的氯霉素可抑制细菌的生长，孟加拉红是一种选择性抑菌剂，也可抑制细菌的生长，并减缓某些霉菌菌落的蔓延生长。孟加拉红琼脂培养基可选择性地抑制细菌生长而不影响霉菌和酵母的生长，排除细菌生长带来的干扰。 在孟加拉红培养基上培养霉菌和酵母，到第2天才开始有菌落生长，以10-1稀释级霉菌和酵母培养第2～5天的生长形态为例来描述霉菌和酵母生长趋势，见图1。霉菌和酵母均在培养至第2天时可以看到明显的菌落，第3～5天霉菌迅速生长，酵母相对比较小，霉菌菌丝蔓延成片。对于霉菌而言培养至第3天的时候菌落已出现连片现象，从正面不易计数，从背面可以清晰看见菌核，易于计数。实验中发现在菌落数比较少的稀释级平板上（如10-2稀释级），培养至第2天到第5