SNT 1736-2006进出口蜂蜜中黄曲霉毒素的检验方法 高效液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1736—2006进出口蜂蜜中黄曲霉毒素的检验方法高效液相色谱法Inspection of aflatoxins in honey for import and export--High performance liquid chromatography2006-01-26 发布2006-08-16 实施益械 14中华人民共和国数码防伤，发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1736—2006前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国河南出人境检验检疫局。本标准主要起草人：杨冀州、刘朝晖、刘亚风、郭俊峰、李全滋。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1736-—2006进出口蜂蜜中黄曲霉毒素的检验方法高效液相色谱法1范围本标准规定了进出口蜂蜜中黄曲霉毒素检验的抽样、制样和高效液相色谱法的测定方法。本标准适用于进出口蜂蜜中黄曲毒素 B1、B²、G, 和 G²的检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。SN/T 0852　进出口蜂蜜检验方法3抽样和制样抽样和制样按SN/T0852的规定进行。4测定方法4.1方法提要试样中的黄曲毒素 B,、Bz、G和 G²用甲醇十水(7+3)提取,提取液经稀释、过滤后,用免疫亲和柱净化。带荧光检测器和柱后衍生装置的高效液相色谱仪测定各种黄曲霉毒素，外标法定量。4.2试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。4.2.1 甲醇。4.2.2 甲醇,HPLC级。4.2.3氯化钠。4.2.4 甲醇+水(7+3):取700 mL甲醇(4.2.1)加300 mL水。4.2.5黄曲霉毒素免疫亲和柱。4.2.6黄曲霉毒素标准品（黄曲霉毒素 BI、Bz2、G1、G²)：纯度≥99%。4.2.7黄曲霉毒素标准储备液：用甲醇(4.2.2)分别配制0.100mg/mL的黄曲毒素 Bl、Bz、Gr、G2标准储备液,冷藏备用。4.2.8黄曲霉毒素混合标准工作液：准确移取适量的黄曲霉毒素 Bi、Bz、G1、G²标准储备液,用甲醇(4.2.2)稀释成混合标准工作液。4.2.9柱后衔衍生溶液(0.05%碘溶液）：称取0.1g碘，溶解于20mL甲醇后，加纯水定容至200mL，以0.45μm的尼龙滤膜过滤，冷藏避光保存。4.3仪器和设备4.3.1高速均质器。4.3.2高效液相色谱仪，配有荧光检测器和柱后衍生化装置。4.3.3玻璃针筒：20mL。4.3.4空气压力泵。1 SN/T 1736—20064.3.5玻璃纤维滤纸：直径11 cm,孔径1.5μm。4.3.6针简式滤膜：0.45um。4.4测定步骤4.4.1提取称取试样约25g(精确至0.1g)于250mL均质杯中，加人5g氮化钠及125mL甲醇十水（4.2.4)，以均质器高速搅拌提取5min，取15mL提取液，加入30mL水，混匀。以玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清。4.4.2免疫亲和柱净化将免疫亲和柱连接于20mL玻璃针筒上，取15mL滤液（相当于1g试样)加入玻璃针简中，将空气压力泵与针筒上端连接，使滤液以1mL/min的流速全部通过免疫亲和柱，再使少量空气通过柱体。以2×10mL水淋洗柱子,奔去全部流出液，再使少量空气通过柱体。加人1mL甲醇（4.2.2)进行洗脱,洗脱速度1 mL/min。洗脱液用 HPLC级纯水定容至-2.0mL,再用0.45 μm滤膜过滤供高效液相色谱测定。4.4.3测定色谱条件a）色谱柱:Cis,150 mmX4.6.mm,5 μm;b)）流动相：甲醇+水(45+55);流动相流速：0.8mL/min;c)荧光检测器：激发波长360nm，发射波长425nm；d）进样量：50μL，e）f)柱后衍生化系统：一衍生溶液：0.05%碘溶液；-——衍生溶液流速:0.2 mL/min;一反应管温度：70℃；一反应时间:1 min。色谱测定根据样液中黄曲霉毒素’B,、Bz、G，和G²的含量，选定峰高相近的混合标准工作液，混合标准工作液和样液中黄曲霾毒素B,、B2、G，和G的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对混合标准工作液和样液按上述条件等体积参差进样，在上述色谱条件下，黄曲霉毒素B,、B、G，和G，衍生物的保留时间分别约为9.30min、7:53min、6.62min、5.25min。标准品的液相色谱图参见附录A中图A.1。4.4.4空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行，4.5结果计算和表述用数据处理装置或按式(1)