SN_T 1961.16-2013出口食品过敏原成分检测 第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.16---2013出口食品过敏原成分检测第 16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分Detecti on of allergen components in food for export-Part 16 :Real time PCR method for detecting mustard components2013-03-01发布2013-09-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1961.16—2013前創言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；-第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；--第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；-第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；-第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；-第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第16部分。本部分按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、上海出人境检验检疫局、深圳大学。本部分主要起草人：曹际娟、张舒亚、郑秋月、蒋丹、徐宝梁、陈颖、刘志刚、吉坤美、吴序栎。1 SN/T 1961.16—2013出口食品过敏原成分检测第16部分：实时荧光PCR方法检测芥未成分 范围1SN/T1961.16的本部分规定了食品中过敏原齐末成分的实府荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原芥末成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限LOD)为0.01%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1过敏原allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原3.2mustard芥末种粉状调料。芥末源于我国,星黄色，微苦，是一种常见的辛辣调料。是芥菜的成熟种子碾磨成的-03.3实时荧光 PCR real time PCR在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3. 4Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数4　方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用芥末的管家基因（Sin)特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，根据Ct值，判断样品中是否存在过敏原芥末成分。5试剂和材料除另有规定外,试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中级水的规格。所有试1 SN/T 1961.16—2013剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1检测用引物（对)序列和探针芥末成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分)引物和探针详见表1。表1试验用引物和探针名称序列(5-3)目的基因内参照5端引物TCT GCC CTA TCA ACT TTC GAT GGT A真核生物内参照3′端引物AAT TTG CGC GCC TGC TGC CTT CCT T18SrRNA基四内参照探针FAM-CCG TTT CTC AGG CTC CCT CTC CGG AAT CGA ACC TAM RA5端引物 1:TGA GTT TGA TTT TGA AGA CGA TAT GG芥末5端引物5端引物 2:TGA GTT TGA GTT TGA AGA CGA CAT GG芥末3端引物3端引物:TGT RTA ACS GCT TTG GAT GCT C芥末 Sin 基因芥末探针探针 1 :FAM-CAG GGH CCA CAG CAG AGG CCA CC-TAMRA探