WST 52-1996尿中马尿酸的分光光度测定方法.pdf

中华人民共和国卫生行业标准尿中马尿酸的分光光度测定方法WS/T 52-1996Urine-Determination of hippuric acid--Spectrophotometric method1主题内容与适用范围本标准规定了尿中马尿酸的分光光度测定方法。本法最低检测浓度为0.006g/L。本标准适用于正常人和接触甲苯工人尿中马尿酸的测定。2原理尿中马尿酸在喹啉存在下与苯磺酰氯反应生成黄色化合物，在乙醇溶液中于470nm下比色定量。3仪器3.1分光光度计，10mm比色杯。3.2旋涡混合器。3.3具塞比色管，10mL。3.4容量瓶，100mL，50mL。3.5聚乙烯塑料瓶或玻璃瓶，100mL。3.6尿比重计。4试剂本标准所用试剂除另有说明外，均为分析纯试剂。4.1实验用水，蒸馏水或同等纯度的去离子水。4.2马尿酸，优级纯。4.3苯磺酰氯。4.4喹啉。4.5无水乙醇。4.6三氯甲烷4.7马尿酸标准溶液。4.7.1贮备液：称取0.1000g马尿酸，用水溶解，定量转入100mL容量瓶内，加水至刻度。此溶液1mL1.0mg马尿酸。置4℃冰箱保存备用。4.7.2应用液：取20.0mL贮备液（4.7.1)于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液1mL=0.4mg马尿酸。在4℃冰箱内可保存一周。4.8质控样加标的模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿。1997-05-01实施中华人民共和国卫生部1996-10-14批准 WS/T 52-19965采样、运输和保存用塑料瓶或玻璃瓶收集接触两天后的班末尿约100mL，尽快测定比重后按100十1的体积比加入三氯甲烷，充分振摇混合，密闭瓶口，运至实验室，于4℃冰箱内可保存两周。6分析步骤6.1样品处理取尿样5.0mL，用水稀释1～5倍，视马尿酸的浓度而定。6.2标准曲线的绘制6.2.1取8支比色管按下表配制标准管。马尿酸标准管的配制管尿酸标准应用液，mL0. 050.100. 150.200.250. 300.40水,mL0.50. 450. 400. 350.300. 250. 200.1000. 020. 040.060.080.100. 120.16马尿酸含量，mg6.2.2向各管加入0.6mL喹啉，混匀后再加入0.2mL苯磺酰氯，立刻盖紧管塞，在旋涡混合器上混合20s（或用手强烈振摇25～30次），在30±2℃条件下避光放置30min。6.2.3向各管加入3.7mL乙醇，混匀，继续避光放置30min。6.2.4用10mm比色杯在波长470nm下，以试剂空白（0号管）为参比，测量吸光度。6.2.5以吸光度为纵坐标，马尿酸含量为横坐标，绘制标准曲线。6.3样品测定6.3.1取0.5mL稀释尿液（6.1)两份，分别加入两支比色管内，其中一支比色管按标准曲线的绘制（6.2.2～6.2.3)步骤操作，另一支比色管只加4.5mL乙醇，作尿样底色测定。若加乙醇后溶液发生混浊，转入离心管，以4000r/min的转速离心10min。6.3.2用10mm比色杯在波长470nm下，以试剂空白管为参比，测定尿样吸光度，以乙醇为参比测定尿样底色吸光度，在测定前后以及每测定10个样品后，测定一次质控样。6.3.3以样品管吸光度值减去尿样底色的吸光度值，由标准曲线上查得马尿酸的含量。7 计算7.1按式(1)计算尿样换算成标准比重(1.020)下的浓度校正系数(k)。1. 020 - 1. 000k=:(1)实测比重－1.0007.2按式(2)计算尿中马尿酸的浓度。m·V1X=·k(2)0. 5 × V,式中：X一尿中马尿酸的浓度，g/L;m—样品吸光度减去尿底色吸光度后由标准曲线上查得的马尿酸含量，mg;Vz-—取尿样体积,mL;V一尿样稀释后的总体积，mL。 WS/T 52-19968说明8.1本法的检测限为0.006g/L；线性范围为0.04～1.6g/L（尿样稀释1～4倍），精密度：CV2.7%5.9%（马尿酸含量为0.062，0.180,0.283g/L，n=6）；准确度：尿样加标回收率为91%97%（加标浓度为0.04，0.12,0.20g/L，n=6)。8.2分析步骤中的试剂加入顺序不能颠倒，当苯磺酰氯加完后应立刻进行振摇，各支管的振摇强度和时间应控制一致。8.3显色开始后各项操作应尽量在避光条件下进行。8.4根据尿样感官颜色确定是否需要配尿样底色管，如颜色正常又经多倍稀释，可免去此步骤。8.5测得浓度超过本法线性范围时，应将尿样适当稀释后重新测定。8.6质控样如使用加标的模拟尿时可考察准确度和精密度。用接触者尿和加标正常尿时可考察精密度。但人尿不易久存。模拟尿只含人尿中的大量成分。附加说明：本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由湖北省卫生防疫站负责起草。本标准主要起草人：