SN_T 1961.10-2013出口食品过敏原成分检测 第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.10--2013出口食品过敏原成分检测第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分Detection of allergen components in food for export-Part 1O :Real time PCR method for detecting shrimp crab components2013-03-01发布2013-09-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1961.10--2013前言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：-第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；-第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；一第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；-第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；-第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；-第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第10部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分主要起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、上海辉睿生物科技有限公司。本部分主要起草人：祝长青、郑秋月、李可、吴福平、蒋原、陈颖、石建华、徐宝梁、曹际娟、张睿、沈崇钰、邵景东、张晓峰、吴亚君、杨海荣、栾军、周阳、蔡宝亮、李辉、徐君怡。 SN/T 1961.10-2013出口食品过敏原成分检测第 10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分1 范围SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原虾/蟹成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原虾/蟹成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限{1:0D)为-0:01%(质量分数）。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范一食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1过敏原allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态成的抗原3.2致敏原虾/蟹成分allergen shrimp crab compound致敏原又称过敏原或变态反应原，是指能够使人发生过敏的抗原。虾/蟹含有多种复杂致敏成分，蛋白是其主要的致敏成分。其食用致敏症状主要表现为产生不同程度的皮肤过敏现象，如浑身发痒和红斑等症状。本标准中致敏原虾/蟹成分即指虾/蟹特异性DNA片段。3.3实时荧光 PCR real time PCR在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3. 4Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。4方法提要样品均质后，提取DNA，以DNA为模板，分别采用虾（16SrRNA）/蟹（细胞色素和16SrRNA）基因的各自特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察任-对引物和探针的实时荧光PCR的1 SN/T 1961.10—2013增幅现象，判断样品中是否存在致敏原虾/蟹成分。5试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符舍GB/T6682中一级水的规格。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1检测用引物和探针5.1.1虾的引物和探针虾 16S rRNA 基因的第一对检测引物和探针序列正向引物:5-GAT TAA GTT ACT TTA GGG ATA ACA GCG-3反向引物:5′-TAA AGG TCG AAC AGA CCTTCT CAC T-3探针:5-荧光基团-CTT CCT TGA AAG TTC ATA TCG ACA GGA AGG G-淬灭基闭