SNT 0175-2010进出口食品中弯曲菌的检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 0175--2010代替SN 0175—1992进出口食品中弯曲菌的检测方法Detection of Campylobacter spp. in food for import and export2010-09-16实施2010-03-02发布中华人民共和国发布器国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 0175—2010前言本标准代替SN0175-1992《出口食品中弯曲杆菌检验方法》。本标准与SN0175—1992相比，主要变化如下：修改和规范了“设备和材料”；增加了蛋及蛋制品等产品的样品制备方法；修改及完善了增菌培养方法;一增加了红嘴鸥弯曲菌等四种弯曲菌种及亚种的生化图谱;增加了 API鉴定试验;增加了选择性培养基改良 CCDA 培养基。本标准的附录 A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖南出人境检验检疫局，中华人民共和国中山出人境检验检疫局，中华人民共和国广东出人境检验检疫局，中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。本标准主要起草人：朱金国、莫瑾、蒋原、伍朝晖、唐连飞、朱中武、许龙岩、王志强、祝长青。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN 0175-1992。 SN/T 0175—2010进出口食品中弯曲菌的检测方法1范围本标准规定了进出口食品中弯曲菌的检测方法。本标准适用于进出口食品中弯曲菌的检测。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB19489　实验室　生物安全通用要求3设备和材料3.1微需氧条件及相关设备：最佳微需氧条件为5%氧气10%二氧化碳和85%氮气，选择合适大小的厌氧罐、密封效果好的密封盒中，或其他能保持微需氧条件的设备中放入微需氧产气袋（如：OXIOD公司生产BR0060A或者CN0035A及同类型产品1)），也可在微需氧恒温工作站中进行培养。3.2离心机：≤20 000g。3.3灭菌离心瓶：250mL。3. 4具过滤网的无菌均质袋。3.5相差显微镜、暗视野显微镜或光学显微镜16×，100×。3. 6载玻片和盖玻片。3.7恒温培养箱:25℃±1℃30℃±1J℃,36℃±1℃以及42℃41℃3.8灭菌培养皿：直径 90 mml3. 9乙酸铅条。3.10麦氏单位标准浊度。3.11均质器：4 000g～8 000g4培养基和试剂4.1 培养基4.1.1Bolton 增菌肉汤：见第A.1章。%蛋白陈水：见A.1.4。4.1.3弯曲菌分离培养基：见第A.2章4.1.4　改良 Skirrow 氏培养基：见 A.2.2。改良 CCDA培养基：见 A.2.1。.6哥伦比亚血琼脂平板：见第A.3章。4.1.7用于生化鉴定的改良半固体培养基：见第A.4章。4. 1.7. 1中性红。甘氨酸。半胱氨酸-HCl。1）给出这一信息是为了方便本标准的使用者，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 SN/T 0175—20硝酸钾。4.1.8三糖铁琼脂斜面：见第 A.5 章。4.1.9改良 O-F 葡萄糖培养基：见第 A.6 章。4.1.10半固体储存培养基：见第A.7章。4.1.11冷冻培养基：见第 A.8章。4.2 试剂4.2.1马尿酸盐和三酮反应试剂:见第 A.9 章。萘啶酮酸和头孢菌素钠：见第 A.1章。.33%过氧化氢。4.2.4冻融马(羊)血。4.2.5氧化酶试剂：见第A.10章。4.2.6革兰氏染色试剂：见第A.11章。4.2.7硝酸盐检测试剂A和B:见第 A.12章。4.2.8APICAMPY鉴定条。5检测程序弯曲菌检测程序见图 1。制备样品接种Bolton肉汤（微需氧）前增菌增菌分离l接种Skirrow和改良CCDA平板（微需氧）镜检哥伦比亚血平板（微需氧）培养氧化酶试验阴性阳性.1%甘氨酸生长试验生化试验或温度耐受试验弯曲菌阴性革兰氏染色.5%氯化钠生长试糖铁反应试验API鉴定试验报告验报告图1弯曲菌检测程序图 SN/T 0175—20106样品的运送和保存在样品的运送及保存过程中不要将样品冷冻，应在4℃士2℃温度条件下保存并尽快进行检测，同时注意不使样品干燥。注：弯曲菌在低温下存活时间较长,但是冷冻状态下可能导致该菌的死亡。７样品制备7.1　总则所有样品的制备均应在无菌条件下操作，制样过程应尽快完成。当存在大量其他菌群时，应使用样品的最初制备液以及1：10的Bolton增菌肉汤稀释液进行增菌培养。7.2龙虾仁和蟹爪称取 50g～100g放人灭菌袋中，置于具过滤衬