NY_T 3290-2018水果、蔬菜及其制品中酚酸含量的测定 液质联用法.pdf

ICS 67.080.10B 31NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3290—2018水果、蔬菜及其制品中酚酸含量的测定液质联用法Determination of phenolic acid in fruits, vegetables and derived products-LC-MS-MS method2018-07-27 发布2018-12-01实施中华人民共和国农业农村部3发布 NY/T 3290—2018前 言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业农村部种植业管理司提出，本标准由全国果品标准化技术委员会（SAC/TC510)归口。本标准起草单位：中国农业科学院果树研究所、农业农村部果品及苗木质量监督检验测试中心（兴城）、北京农业质量标准与检测技术研究中心。本标准主要起草人：聂继云、李静、冯晓元、王蒙、闫震、高媛、李志霞、李海飞、匡立学、王瑶。I NY/T 3290—2018水果、蔬菜及其制品中酚酸含量的测定液质联用法1范围本标准规定了水果、蔬菜及其制品中酚酸含量的液质联用测定方法。本标准适用于水果、蔬菜及其制品中14种主要酚酸的含量测定，本标准的方法检出限和定量限见附录A。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8855新鲜水果和蔬菜取样方法3原理水果、蔬菜及其制品中的酚酸经甲醇提取和碱性水解液提取处理得到游离型酚酸、游离酯型酚酸和结合型酚酸，经固相萃取小柱净化，超高效液相色谱柱分离，三重四级杆质谱检测，外标法定量4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1盐酸(HCI)：优级纯。4.1.2甲酸(HCOOH)：色谱纯。4.1.3甲醇(CH:OH)：色谱纯。4.1.4乙睛(CH:CN)：色谱纯。4.1.5氢氧化钠(NaOH)：优级纯。4.1.6提取剂：甲醇十水+盐酸一80十20+0.05(V+V+V)，取800mL甲醇（4.1.3）、200mL水和0.5mL盐酸（4.1.1)，混匀。4.1.74mol/L氢氧化钠溶液：称取160.0g氢氧化钠（4.1.5），用水溶解定容至1000mL。4.2标准品14种酚酸标准品：纯度≥98%，相关信息见附录A。4.3标准溶液配制4.3.1酚酸标准储备液：称取酚酸标准品10.00mg，用甲醇（4.1.3）溶解并定容至10mL，配制成1mg/mL的各酚酸标准储备液，在一20℃保存，可使用12个月。4.3.2酚酸混合标准溶液：根据需要，准确吸取一定量的各酚酸标准储备液，用甲醇（4.1.3)稀释成适当浓度的混合标准溶液，现用现配。4.4材料4.4.1有机相微孔滤膜：0.22μm。4.4.2固相萃取小柱：OasisHLB固相萃取小柱，200mg,6mL,或性能相当者1 NY/T 3290—20185仪器5.1液相色谱仪：配有三重四级杆质谱检测器，5.2电子天平：感量为0.01g和0.0001g。5.3离心机：可达到9000r/min以上。5.4振荡器：带有温度控制。5.5超声波清洗器。5.6旋转蒸发仪：带有温度控制。6试样的制备水果、蔬菜及其固体制品按GB/T8855的规定取样，四分法取约250g，将可食部分切碎，立即用液氮冷冻，研磨成粉末，备用。液体果蔬制品直接混匀备用。7分析步骤7.1提取称取10.00g试样于50mL棕色离心管中，加人30mL提取剂（4.1.6），混匀，室温下超声20min，9000r/min离心5min，上清液转人50mL棕色容量瓶中，残渣再用约10mL提取剂（4.1.6)按上述步骤重复提取一次，合并两次提取液，用提取剂（4.1.6）定容至50mL用于游离型酚酸和游离酯型酚酸的制备，残渣用于结合型酚酸的制备。7.2酚酸的制备7.2.1游离型酚酸的制备吸取10.00mL样品提取液（7.1）于100mL旋转蒸发瓶中，40℃下减压蒸发除去提取液中的有机溶剂，浓缩至近干，加人2mL水，摇匀，备用，即为溶液A。将固相萃取小柱（4.4.2)依次用约5mL甲醇（4.1.3)和约5mL水预淋洗、活化，将溶液A加到固相萃取小柱中，缓慢抽滤，滤液需呈滴状，弃去滤液，用2mL水清洗旋转蒸发瓶，转人固相萃取小柱中，抽滤，弃去滤液，用约5mL甲醇（4.1.3)分两次清洗旋转蒸发瓶，加人到固相萃取小柱中，收集滤液，用甲醇（4.1.3)定容至5mL，混匀，过滤膜（4.4.1）待测。7.2.2游离酯型酚酸的制备吸取10.00mL样品提取液（7.1)于100mL旋转蒸发瓶中，40℃下减压蒸发除去提取液中的有机溶剂，浓缩至近干，用10