SN_T 2705-2010调味品中转基因植物成分实时荧光PCR定性检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2705—2010调味品中转基因植物成分实时荧光PCR定性检测方法Protocol of the Real-time Fluorescence qualitative polymerase chain reactionfor detecting genetically modified plant components in condiments2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国发布303.国家质量监督检验检疫总局数码防行 SN/T 2705-2010前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、北京望尔生物技术有限公司。本标准主要起草人：李丹宁、高东微、钟玉清、张隽、万宇平、蔡颖、谢佩心、陈源树、庄逸林、冯才伟、钟国强、马骏。 SN/T 2705--2010调味品中转基因植物成分实时荧光 PCR定性检测方法范围1本标准规定了调味品中转基因植物成分实时荧光PCR定性检测方法。本标准适用于以玉米、大豆、油菜籽马铃薯大米番茄等农产品及其加工产品为原料生产的调味品中转基因植物成分的实时荧光PCR定性检测。本标准适用的调味品按照GB/T20903,分为酱类、豆豉、腐乳、蚝油、香辛料和香辛料调味品、复合调味料、火锅调料，具体包括豆酱、面酱、番茄酱、辣椒酱、芝麻酱、花生酱、芥末酱，豆豉,腐乳蚝油.香辛料、香辛料调味粉，鸡精调味料、鸡粉调味料、牛肉粉调味料、海鲜调味料，风味酱、沙拉酱、蛋黄酱，火锅底料、火锅蘸料等。其他调味品参照使用。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。瓦是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法GB/T20903‘调味品分类／GB/T 27025检测和校准实验室能功的通用要求。植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法SN/T 1204 *3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1. 1调味品　condiment在饮食、烹饪和食品加工中广泛应用的，用于调和滋味和气味并具有去腥、除腹、解腻、增香、增鲜等作用的产品。3.1.2DNA 的提取和纯化 DNA extraction and purification从测试样品的各种成分中释放DNA，随后纯化DNA去除 PCR反应抑制剂。3.1.3外源基因exogenous gene利用生物工程技术转人的其他生物基因,使该生物品种表现新的生物学性状。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。 SN/T 2705—2010EPSPS(5-enolpyruvylshkimate-3-phosphate synthase gene):5-莽草酸-3-磷酸合酶基因FAM(6-carboxyfluorescein):6-羧基荧光素GOS(A root-specific rice gene highly expressed in roots from seedlings and mature plants whichencodes a 14 kDa protein）：编码一个14kDa蛋白质、在幼苗和成熟植株根部高度表达的水稻种属特异性基因LA（linear acrylamide）：线状烯酰胺NOS(terminator of nopaline synthase gene):胭脂碱合酶基因终止子TAMRA(carboxy-tetramethyl-rhodamine):羧基四甲基罗丹明tRNALeu:叶绿体亮氨酸转运核糖核酸基因4方法提要调味品多属于深加工食品，一方面DNA在食品加工过程中受到破坏，另一方面调味品可能富含盐、糖、蛋白质、发酵产生的有色物质等，这些因素均会影响 DNA提取纯化和 PCR检测效果。本标准应用CTAB-LA协同沉淀和低温差速离心等实验技术，对调味品中的植物基因组 DNA进行分离、纯化和浓缩，使之适用于 TaqMan实时荧光 PCR检测技术,通过检测其中是否含有各种外源基因，达到对调味品中转基因植物成分定性 PCR检测的目的。5 材料与试剂5.1设备和材料5. 1. 1高速冷冻离心机：最高转速18000r/min。台式离心机：最高转速18000r/min。5. 1.25. 1.3微型个人离心机。双温水浴：37℃±1℃、65℃±1℃。.5制冰机。冰箱:2℃～8℃、-20℃、80℃。