SN_T 3567.11-2017交叉引物恒温扩增检测方法 第11部分：志贺菌.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3567.11—2017交叉引物恒温扩增检测方法第11部分：志贺菌Detection method of crossing priming isothermal amplification-Part 11: Shigella2017-07-21发布2018-03-01实施中华人民共和国3O发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T3567.112017創言前SN/T3567《交叉引物恒温扩增检测方法》分为11个部分：第1部分：通用技术规程；第2部分：霍乱弧菌；第3部分：大肠杆菌O157：H7；第4部分：黄热病毒；第5部分：沙门菌属；第6部分：结核分枝杆菌；第7部分：肠道病毒71型；第8部分：症原虫；第9部分：鼠疫耶尔森菌；第10部分：炭疽芽孢杆菌；第11部分：志贺菌。本部分为SN/T3567的第11部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国河北出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局、杭州优思达生物技术有限公司。本部分主要起草人：王馨、沈军、朱俊贤、原静、李浩辰、祁军、胡林、龙其敏。 SN/T3567.11—2017交叉引物恒温扩增检测方法第11部分：志贺菌1范围SN/T3567的本部分规定了国境口岸志贺菌属交叉引物恒温扩增法检测的对象、检测程序及检测结果的报告。本部分适用于志贺菌属筛查检测，以及对国境口岸出人境人员感染志贺菌属的实验室检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全全通用要求WS287—2008细菌性和阿米巴性痫疾诊断标准人间传染的病原微生物名录（卫生部20063术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1CPAalamplification;交叉引物恒温扩增技术crossingprimingisotherm广增体系中除包含具有链置换功能的DNA聚合酶（DNAPoly-一种核酸恒温扩增技术，CPA恒温一和检测引物这些寡聚核苷酸链能依靠该DNA聚合酶的merase)外，还主要包括交叉引物、剥离引物高活性的链置换特性，使脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid,DNA)的循环扩增能不断的实现。3.2交叉引物crossingprimer用于交叉扩增的主要引物，其中正向引物的5末端序列与反向引物的杂交序列相同，而反向引物的5末端序列与正向引物的杂交序列相同，因此在扩增过程中这两条引物互相引入对方的杂交序列，增加引物的杂交位点，促进扩增反应。3.3剥离引物bumperprimer位于交叉扩增引物后方的短链引物，其作用是在链置换DNA聚合酶的作用下，将扩增引物的延伸链从模板上剥离。3.4检测引物detection primer-对位于交叉引物内侧的短链引物，需要用半抗原或荧光素标记，其作用是使扩增产物带有该标记，以用于检测。1 SN/T3567.11—20173.5BstDNA聚合酶BstDNApolymerase嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillusstearothermophilus)DNA聚合酶的部分片段，保留了其5→3DNA聚合酶活性，但是去除了5→3核酸外切酶活性。BstDNA聚合酶最主要的特性是具有超强的链置换功能（StrandDisplacement)。4缩略语下列缩略语适用于本文件。dNTPs：脱氧核苷三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosinetriphosphate)dTTP：脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidinetriphosphate）dCTP：脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidinetriphosphate）dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosinetriphosphate）5生物安全措施为了保护实验室人员的安全，按照GB19489和原卫生部颁布的《人间传染的病原微生物名录》（2006)的规定，应由具备相关资格的工作人员进行实验操作。所有废弃物也应按照GB19489中的有关规定执行。6检测对象6.1痢疾志贺菌、福氏志贺菌、鲍氏志贺菌和宋内志贺菌菌株。6.2疑似感染志贺菌属病人粪便标本。1试剂和材料7.1除另有规定外，所使用的试剂为分析纯或生化试剂，水为按照GB/T6682规定的一级水。7.2DNA提取试剂：5%Chelex水溶液