WST 221-2002免疫沉淀分析标准--有关应用材料的评价.pdf

C 50N中华人民共和国卫生行业标准WS/T 221-2002免疫沉淀分析标准有关应用材料的评价Guidelines for immunoprecipitin analyses-Procedures for evaluating the performance of materials2002-04- 20 发布2002-07-01实施中华人民共和国卫生部•发布 WS/T 221--2002前言本标准的制定有助于免疫沉淀分析试剂的相关厂商统一试剂的制备方法，同时有利于临床实验室进行免疫沉淀分析的标准化质量管理，从而改变目前在免疫沉淀分析方面的混乱状况。本标准从2002年7月1日起实施。本标准由卫生部医政司提出。本标准起草单位：上海医科大学华山医院。本标准主要起草人：吕元、朱玉胜。本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负贵解释。 中华人民共和国卫生行业标准免疫沉淀分析标准有关应用材料的评价WS/T 221-2002Guidelines for immunoprecipitin analyses-Procedures for evaluating the performance of materials1 范围本标准建立了免疫沉淀分析所用材料制备的评价程序，同时介绍了常用的免疫沉淀分析方法的特异性问题，提出了试剂盒说明书中应包含的必要信息，推荐了参考品的制备方法。本标准适用于从事免疫沉淀分析的临床检验人员及相关试剂生产厂商。2抗体质量评估及免疫化学特异性的评价2.1免疫原的质量评估制备抗血清时，通常不需要使用单克隆蛋白质或来自单一供体的蛋白质作为免疫原，但应使用来自正常组织及体液中的正常蛋白质分子和/或同种型蛋白质以避免独特型或同种异型分子特异性对检测的于扰。在本标准中，主要以各种免疫球蛋白为例加以说明,因为这些免疫球蛋白分子代表了实验室所测定的蛋白质中抗原变异最大的。有关免疫球蛋白免疫沉淀分析的评价也可作为评价其他特异性较低的血清蛋白质分析时的参考。制备抗体时，所用免疫原应包括所有抗原亚型，以尽可能避免所制备抗体的反应性及特异性的差异。例如：用于制备抗IgG抗体的免疫原免疫动物产生的抗血清经适当处理后只能与IgG分子反应，而不能与其他种类的免疫球蛋白或血清、血浆、尿液、脑脊液、精液、组织液及异常病理性体液中的其他蛋白质反应，产生的抗血清应当主要包含针对四种 IgG亚类（IgG1、IgGz、IgG3、IgG4)分子的共同部位的抗体，而且对这些亚类分子的反应性不应存在差异。抗血清不应与任何一种免疫球蛋白的游离型或结合型轻链发生沉淀反应。许多血清蛋白具有多态性及不同表位(如αi-抗胰蛋白酶和结合珠蛋白),免疫原应尽可能包括此类蛋白分子的所有形式。抗IgA的制备亦应基本符合以上规定，即制备的抗IgA应与IgA,、IgA,均能发生反应。IgM尚未发现亚类的存在，制备抗 IgM的免疫原应使用包括Waldenstroms巨球蛋白个体的血清及正常人血清。2.1.1同种型特异性当某种免疫原用于制备针对异常免疫球蛋白组分的抗血清时，应注意同种型特异性问题。目前尚无可与所有临床样品均能发生反应的商品化抗血清，所以尽管这些抗血清是通过一系列纯化的蛋白质免疫动物产生的，但是偶尔会出现某种样品不能与抗血清进行完全反应的情况。2.1.2免疫原的降解当免疫原可能发生显著改变分子结构的降解及欲分析样品在贮存过程中可能发生降解时，应使用其已降解的最稳定分子形式作为免疫原，而不是采用其在体内状态下的天然形式。例如：用于制备抗C3的抗血清时，应采用已降解且稳定的C3c(B1a)作为免疫原。中华人民共和国卫生部2002-04-20批准2002-07-01实施1 WS/T 221--20022.2抗体的特异性评估2.2.1方法对多克隆抗血清的特异性评估应使用敏感度高的方法，如交叉免疫电泳、免疫印迹法等，不要使用敏感度及精确度差的方法如免疫扩散、免疫电泳等。单克隆抗体的特异性检查应采用竞争抑制模式，方法学可选择放免法、酶免法或免疫印迹法。2.2.2检测用交叉免疫电泳法评价抗血清特异性的方法是在第二方向电泳完成后，凝胶在室温下孵育染色1 h后观察结果。用免疫印迹法进行评估时,转移膜应与抗血清孵育1.5 h,蛋白质条带的染色可用考马斯亮兰、银染、胶体金或其他具有相似敏感度的染料，不能使用丽春红S、氨基黑、快绿。2.2.3材料尽量包括所有可能采用的材料如血浆、尿液及脑脊液,并且有不同稀释度(1：20、1：5、不稀释、最适浓度等），在使用脑脊液或尿液时，应使用10倍或100倍浓缩样品作为质控物。用于抗血清定性评估的抗原可来源于新鲜血清、血浆。若怀疑或已知有交叉反应存在，在对抗血清进行特异性评估时，应使用含有交叉反应抗原的样品，并说明交叉反应的程度。2.2.4免疫沉淀法主要检测的蛋白质