NY_T 2871-2015水稻中43种植物激素的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICS 65.020.01B 05NY中华人民共和国农业行业标准NY/T稻中43种植物激素的测定液相色谱一串联质谱法Determination of 43 plant hormones in rice-Liquidchromatography-Tandem mass spectrometry2015-12-29发布2016-04-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2871---2015前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：农业部稻米及制品质量监督检验测试中心、中国水稻研究所。本标准主要起草人：曹赵云、陈铭学、牟仁祥、张卫星、章林平、朱智伟。- NY/T2871---2015水稻中43种植物激素的测定液相色谱一串联质谱法1范围本标准规定了水稻中43种植物激素（见附录A)的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于水稻植株的根、茎、叶等组织中43种植物激素含量的测定本标准的方法检出限为0.02ng/g～8.0ng/g。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1植物激素planthormone由植物自身合成，通常自产生部位移动到作用部位，并在极低浓度下具有显著生理作用的微量有机物质，也被称为植物天然激素或植物内源激素。4原理试样用甲醇溶液提取，提取液经稀释后用混合型离子交换固相萃取柱净化，液相色谱一串联质谱测定，根据色谱保留时间和质谱碎片及其离子丰度比定性，外标法定量。5试剂和材料以下所用试剂，除特殊注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的一级水。5.1甲醇(CH;OH)：色谱纯。5.2乙醇(C²H;OH)：色谱纯。5.3甲酸（HCOOH)：色谱纯。5.4二甲基亚砜(C,HsOS):色谱纯。5.5甲醇十水（20+80)：取20mL甲醇（5.1)加80mL水，混勺。5.6甲醇+水（80+20）：取80mL甲醇（5.1)加20mL水，混匀。5.7甲醇+水（60十40）：取60mL甲醇（5.1)加40mL水，混匀。5.8乙醇+水（80+20）：取80mL乙醇（5.2)加20mL水，混勺。5.91%甲酸溶液：准确吸取1.00mL甲酸(5.3)加水至100mL。5.101%甲酸甲醇溶液：准确吸取1.00mL甲酸（5.3)加甲醇（5.1)至100mL。5.111mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠(NaOH)加水溶解至100mL。5. 1220.1mol/L氢氧化钠甲醇溶液：称取0.4g氢氧化钠（NaOH)加甲醇（5.1)溶解至100mL。5. 1330.5%氨水甲醇溶液：准确吸取0.50mL氨水(NHOH)加甲醇5.1)至100mL。 NY/T2871—20155.145mmol/L甲酸铵：称取0.315g甲酸铵（HCOzNH4）加水溶解至1000mL。5.1543种植物激素标准品：纯度≥98%，见附录A。5.16植物激素标准溶液配制5.16.1标准储备液：分别称取各植物激素标准品（精确至0.1mg）至棕色容量瓶中，根据标准物的溶解性选甲醇、乙醇等溶剂（见附录A）配成浓度为1000ug/mL的标准储备溶液，于一80℃保存。5.16.2混合标准储备液：分别吸取一定量的43种植物激素标准储备液（5.16.1），置于棕色容量瓶中，用甲醇稀释成浓度为1.00ug/mL的混合标准储备液，于一80℃保存。5.16.3混合标准工作溶液：分别吸取一定量的混合标准储备液（5.16.2），用甲醇十水（20十80)稀释成浓度为0.02ng/mL～100ng/mL的植物激素混合标准工作溶液，临用新配。5.17混合型阴离子交换固相萃取柱：60mg，3mL;或其他等效柱。使用前依次用2mL甲醇和2mL水活化。5.18混合型阳离子交换固相萃取柱：60mg，3mL,或其他等效柱。使用前依次用2mL甲醇和2mL1%甲酸溶液（5.9)活化。5.19液氮。5.20滤膜：0.22μm，有机相。6仪器6.1液相色谱一串联质谱仪：配电喷雾离子源(ESI)。6.2分析天平：感量士0.0001g。6.3漩涡混合器。6.4冷冻离心机：最高转速大于或等于5000r/min。6.5氮吹仪。6.6超低温冰箱：温度可至一80℃。7试样制备取新鲜的水稻植株，如根、茎、叶等供试样，用水洗净样品附着的杂物，表面水分用吸水纸擦干，剪碎，于研钵中加液氮磨细，混匀，立即转移至一80℃冰箱中避光保存。8分析步骤8.1提取称取约0.2g试样（精确到0.1mg）于15mL塑料离心管中