SN_T 1961.19-2013出口食品过敏原成分检测 第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.19--2013出口食品过敏原成分检测第 19部分：实时荧光 PCR方法检测大豆成分Detection of allergen components in food for export--Part 19 : Real timePCR method for detecting soybean components2013-03-01发布2013-09-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1961.19-2013前言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；-第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；-第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；一第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第19部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张舒亚、郑秋月、徐杨、曹际娟、李妮、张佳谊、吕蓉、陈颖、徐宝梁。I SN/T 1961.19-2013出口食品过敏原成分检测第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分1 范围SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原大豆成分的实时荧光PGR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原大豆成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为0..01%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注且期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1过敏原allergen长皮应的抗原又称致敏原或变应原，是指能够引起变3.2大豆soybean别名黄豆、青豆、黑豆，属豆科（Leguminosae)大豆属（Glycine)学名：Glycine mac。3.3实时荧光 PCRreal time PCR在 PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3.4Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。4方法提要样品经研磨后,提取 DNA,以 DNA 为模板,采用大豆的管家基因(Lectin,植物凝集素基因)特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，判断样品中是否存在过敏原大豆成分。1 SN/T 1961.19—20135 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1大豆成分扩增引物和探针、内参照(真核生物成分)引物和探针详见表1。表1试验用引物和探针名称序列(5-3)目的基因TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA内参照5端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT内参照3端引物真核生物18SrRNA基因FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC内参照探针C-TAMRA大豆5端引物 GCCCTCTACTCCACCCCCA大豆3端引物GCCCATCTGCAAGCCTTTTT大豆Lectin 基因大豆探针FAM-AGCTTCGCCGCTTCCTTCAACTTCAC-TAMRA5.2 CTAB缓冲液:55 mmol/I. CTAB,1 400 mmol/1, NaCl.20 mmol/L. EDTA,100 mmol/I. Tris.用10%盐酸调pH至8.0,121℃，高压灭菌20min，备用。5.3 TE缓冲液(Tris-CI、EDTA缓冲液):10