SN_T 4634-2016茶黄蓟马检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4634—2016茶黄蓟马检疫鉴定方法Detection and identification of Scirtothrips dorsalis Hood2016-08-23 发布2017-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T4634—2016前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江西出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国新疆出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院植物检疫研究所、江西农业大学。本标准主要起草人：黄丽莉、高渊、王、祝建新、阙海勇、陈乃中、车飞、薛芳森、何海敏。 SN/T 4634--2016茶黄蓟马检疫鉴定方法1范围本标准规定了茶黄蓟马的检疫和鉴定方法。本标准适用于进出境植物及其产品传带的茶黄蓟马的检疫和鉴定。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。注：其他蓟马分类学常见术语图参见附录A。2.1过渐变态hyperpaurometabola为不全变态中特殊的一类，其若虫在变为成虫前要经过一个不食又少动的类似的虫龄。2.2Eforked sense cones叉状感觉锥位于触角第Ⅱ、IV节上、呈叉状的感觉器官。2.3后单眼繁postocular setae位于单眼三角区后侧的1对刚毛。3茶黄蓟马基本信息学名：Scirtothrips dorsalis Hoods,1919英文名：Chillithrips异名: Anaphothrips andreae Karny; Anaphothrips fragariae Giard; Heliothrips minutissimusBagnall Neophysopus fragariae Girault; Scirtothrips andreae （Karny); Scirtothrips fragariae(Grault) ; Scirtothrips minutissimus (Bagnall); Scirtothrips padmae Ramakrishna; Scirtothrips dor-salis var.padmae Ramakrishna.分类地位：属缕翅目（Thysanoptera）、蓟马科（Thripidae）、硬蓟马属（Scirtothrips）。为过渐变态昆虫，一生要经过卵、若虫和成虫三个阶段。该属内在形态上与茶黄蓟马近似的种主要有S.aurantii，S.citri,S.nermis ,S.longipennis,S.mangiferae,S.oligochaetus.茶黄蓟马的其他信息参见附录B。4方法原理依据该虫的危害习性和危害状进行检测，收集样本。分类鉴定以成虫的形态特征作为鉴定依据，以PCR特异性扩增片段作为鉴定的参考依据。I SN/T4634—20165仪器、用具及试剂5.1仪器设备体视显微镜、生物显微镜、扫描电镜、PCR仪、电泳仪、凝胶成像、超低温冰箱。5.2用具手持放大镜、小镊子、解剖针、剪刀、白瓷盘、脱脂棉、载玻片、盖玻片、吸管、小毛笔、玻璃瓶、酒精灯、小玻瓶。5.3试剂5%氢氧化钾、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、蒸馏水、二甲苯、丁香油、中性树胶、蓟马保存液（75%乙醇：冰醋酸=20：1）、Hoyer氏液（阿拉伯胶30g，水合氯醛200g，甘油20g，蒸馏水50mL，混合加热，待充分融合后再过滤）、六甲基二硅胺烷（HMDS）。Tris（三羟甲基氨基甲烷）、EDTA（乙二胺四乙酸）、NaCI、SDS（十二烷基硫酸钠）、蛋白酶K、10XPCR反应缓冲液、MgCl2、PCR引物sdi-16F/sdi-20R、Taq聚合酶、dNTP、DNAMarker、溴化乙锭(EB)。6现场检查检查切花、切枝时，先在地上或实验台上置一白瓷盘，最好再铺上层深色纸，然后倒持切花、切枝轻轻抖动，蓟马受惊后会从切花、切枝掉落到盘上，将盘上的蓟马用蘸有75%乙醇的小毛笔收集到盛有蓟马保存液的透明小瓶内。检查植株时，应注意检查叶面和叶背、枝条、幼果、花萼的隐蔽处，仔细观察是否有蓟马为害状，其中是否隐藏该虫；尤其要注意嫩枝上的弯曲叶片、呈银化或褐斑、线性增厚的叶片、花萼和幼果的果蒂等部分。检查果实时，观察果实表面是否有灰色至黑色的疤痕且成弯曲的、不规则的、交错的条纹状；仔细检查果实的表面，尤其是果柄处、盛放果实的包装内壁、夹缝处，如发现肉眼可见两头尖、行动迅速、体长约0.6mm~1mm的昆虫，将其放人保存液中。在25℃～30℃下，卵历期5d～8d，可在室温下将样品植株插于盛装适量水的容器内保湿，冬天可在25℃植物生长箱内放置8d，之后检查是否有若虫。或