SN_T 3924-2014出口贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3924—2014出口贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测方法Test method for the enumeration of coliform and fecal coliformin shellfish for export2014-11-01 实施2014-04-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局电话406982155刮涂层查真伪工 SN/T 3924—2014前言本标准按照 GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陈彬、郑晶、陈俊玉、陈舒奕、薛芝敏、黄晓蓉、郑麟毅、董健、林杰、彭华毅I SN/T 3924—2014出口贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测方法1范围本标准规定了贝类中大肠菌群、粪大肠菌群计数方法。本标准适用于双壳贝类、生鲜去壶见肉生鲜去壳冷冻贝肉和半壳冷冻贝类中大肠菌群、粪大肠菌群计数。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T4789.20　食品卫生微生物检验，水产食品检验GB17378.3　海洋监测规范第3部分样品采集:贮存与运输SN/T1538.1培养基制备指南 第1部分实验室培养基制备质量保证通则SN/T 1538.2培养基制备指南第2部分:培养基性能测试实用指南3术语和定义.下列术语和定义适用于本文件3.1coliforms大肠菌群需氧及兼性厌氧，能在36℃48h分解乳糖声酸产气的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌。、3.2粪大肠菌群 fecal coliforms需氧及兼性厌氧，能在44.5℃±0.5℃24.h发酵乳糖产酸产气的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌,该菌又可称耐热大肠菌群（thermotolerant coliform organisms）。4检验方法4.1原理最可能近似值(MPN)法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出大肠菌群、粪大肠菌群在待测样品中的最大可能数。4.2培养基和试剂4.2.1月桂基硫酸盐胰蛋白陈(LST)肉汤:见附录 A中 A.2。4.2.2 乳糖(LB)肉汤:见 A.3。1 SN/T 3924--20144.2.3煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤：见 A.4。4.2.4　大肠杆菌(EC)肉汤：见 A.5。4.2.5磷酸盐缓冲液：见A.6。%蛋白陈水:见 A.7。4.2.7 无菌1 mol/L NaOH:见 A.8。4.2.8 无菌 1 mol/L HCl:见 A.9。4.3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a）恒温培养箱:35℃±1℃；b）冰箱:2℃～5℃;c)恒温水浴箱：44.5℃±0.2℃；d)天平:感量0.1g;e)均质器；f)振荡器；g)无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；h）无菌锥形瓶：容量500mL;i）无菌培养皿：直径90mm;j)pH计或 pH 比色管或精密 pH试纸。4.4样品的采集样品的采集及处理按GB17378.3以及GB/T4789.20的规定执行。4.5样品的制备称取200g贝肉及壳瓣内液体，放人盛有200mL磷酸盐缓冲液或0.5%蛋白陈水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放人盛有200mL磷酸盐缓冲液或0.5%蛋白陈水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：2的样品匀液。贝类样品匀液在均质后2 min 内即用磷酸盐缓冲液或0.5%蛋白陈水进行系列样品稀释。4.6样品的稀释4.6.1样品匀液的 pH应在 6.5～7.5之间，必要时分别用1 mol/L NaOH 或 1 mol/L HCI调节。4.6.2用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：2样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或0.5%蛋白陈水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：20的样品匀液。4.6.3根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或移液器吸头。从制备样品匀液至样品稀释完毕，全过程不得超过15 min。4.7大肠菌群MPN法的测定4.7.1初发酵试验从4.6.3中选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度均接种5管月桂基硫酸盐胰蛋白陈(LST)肉汤或乳糖（LB)肉汤，每管接种 2