NY 551-2002产蛋下降综合征诊断技术.pdf

ICS 11. 220B 47NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 551—2002产蛋下降综合征诊断技术Diagnostic techniques for egg drop syndrome2002- 08-27 发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布 中华人民共和国农业行业标准产蛋下降综合征诊断技术NY/T 551—2002中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售*印张 1/2字数 11千字开本880×12301/162002年12月第一次印刷2002年12月第版印数1-1500 NY/T 551—2002前言产蛋下降综合征（egg drop syndrome，简称EDS)是一种使母鸡产蛋减少、蛋质下降，由腺病毒引起的病毒性传染病，已成为产蛋损失的主要原因。我国农业部把该病列为二类动物疫病。本标包括临床诊断、病毒分离和红细胞凝集抑制试验三种诊断技术。本标准的附录 A为规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：天津出人境检验检疫局、哈尔滨兽医研究所。本标准主要起草人：曹燮政、唐秀英、柯忠哲、米保国、韩惠珠。 NY/T 551—2002产蛋下降综合征诊断技术1范围本标准规定了产蛋下降综合征的诊断技术要求。本标准适用于鸡的产蛋下降综合征的诊断和检疫,对其他禽类本病的检疫可以参照执行。2 临床诊断2.1通过询问工作人员和查阅兽医记录，调查被检鸡群在过去一年内是否出现过产蛋下降综合征的症状，是否有产蛋下降综合征病例接触史，是否进行过相关的免疫接种，了解鸡群的来源及上代种群的疫病史，周围1km 范围内是否发生过产蛋下降综合征,是否有水禽场或野生水禽栖息地。2.2临床检查时要查阅鸡群生产记录和进行现场观察，重点注意下列情况：a）鸡群产蛋率下降15%～60%；b）鸡蛋破损率5%～20%；c）鸡蛋中有较多的畸形蛋、软壳蛋、无壳蛋、薄壳蛋、砂壳蛋，时有水样蛋清，棕色蛋鸡生产浅色蛋、白壳蛋；d）如不同品种鸡同时感染，产棕色蛋的品种减产甚于产白色蛋的品种；e）精神、采食、排泄及运动无明显异常。3 实验室检验3.1病毒分离和鉴定3.1.1试剂3.1.1.1pH7.20.01mol/L.磷酸盐缓冲生理盐水(PBS）,配制方法见附录A（规范性附录）。3.1.1.2产蛋下降综合征抗原(EDS-76)。3. 1.1.3 EDS-76阳性血清。3.1.2样品的采集和处理酌情选择下列一种或数种：a）采扑杀鸡的输卵管和子宫的黏膜、卵巢,加灭菌石英砂研磨,加 PBS 制成 1：5 混悬液后冻融3次，3000r/min离心20min，取上清液，加人青霉素（使最终浓度为1000IU/mL）、链霉素（使最终浓度为1 000 μg/mL),37℃作用1 h。b）采减产鸡的咽喉部、泄殖腔拭子,浸人 5mL PBS中充分涮挤后弃去拭子。将浸出液冻融2次，3000r/min离心20min，取上清液加人青霉素（使最终浓度为3000IU/mL）、链霉素（使最终浓度为3 000 μg/mL),37℃作用1 h。c）采劣质蛋清，加等量PBS和青霉素（使最终浓度为1000 IU/mL）、链霉素（使最终浓度为1 000 μg/mL),37℃作用1 h。d）采减产鸡抗凝血20 mL，2000r/min离心10min，弃上清液，吸取上层灰白色的白细胞层,加PBS洗涤、离心2次，弃上清液，再用5mL PBS悬浮白细胞，冻融3次，加青霉素（使最终浓度为1000IU/mL）、链霉素（使最终浓度为1000μg/mL），37℃作用1h，离心，取上清液。3.1.3接种分离取孵育10d～12d来自产蛋下降综合征红细胞凝集抑制抗体阴性鸭场鸭胚50枚，绒毛尿囊腔接种1 NY/T 551—2002样品（3.1.2)25枚，另25枚接种PBS,接种量均为0.2mL/枚。37℃C孵育。弃48h内死亡的鸭胚，收获48h～120h死亡和存活的鸭胚尿囊液。用1%鸡红细胞悬液（见3.2.2.4)测其血凝性（方法同3.2.4)，若接种样品的鸭胚尿囊液能凝集红细胞，而接种PBS的鸭胚尿囊液不凝集红细胞，则进行分离物鉴定（见3.1.4）；若样品接种鸭胚尿囊液不凝集红细胞，则用尿囊液接种鸭胚盲传，样品连续盲传三代仍不凝集红细胞者可判为病毒分离阴性。3.1.4分离物的鉴定用阳性血清和被鉴定抗原按表1进行红细胞凝集抑制试验，方法同3.2.5（阳性血清被鉴定抗原抑制滴度应与 EDS-76对照抗原滴度相一致)。表中示例结果表示EDS-76病毒分离试验阳性。表1应用红细胞凝集抑制试验鉴定分离物血 清抗東原分离毒株阳性血清EDS-76抗原