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ICS 65.150B 50Sc中华人民共和国水产行业标准SC/T 7016.2-2012鱼类细胞系第2部分:草鱼肾细胞系(CIK)Fish cell lines-Part 2 :Grass carp kidney cell line (CIK)2012-12-07 发布2013-03-01实施中华人民共和国农业部发布
SC/T 7016.2—2012前 創言SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分:第1部分:胖头肌肉细胞系(FHM);第2部分:草鱼肾细胞系(CIK);第3部分:草鱼卵巢细胞系(CO);-第 4部分:虹鳟性腺细胞系(RTG-2);第5部分:鲤上皮瘤细胞系(EPC);-第6部分:大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE);-第7部分:棕鲫细胞系(BB);-第8部分:斑点叉尾卵巢细胞系(CCO);-第9部分:蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2);第10部分:狗鱼性腺细胞系(PG);第11部分:虹鳟肝细胞系(R1);第12 部分:鲤白血球细胞系(CLC);本部分为SC/T7016的第2部分。本部分按照GB/T 1.1给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。本部分起草单位:全国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人:陈爱平、兰文升、高隆英、张利峰、徐立蒲、钱冬、刘琪。T
SC/T 7016. 2--2012鱼类细胞系第2部分:草鱼肾细胞系(CIK)1范围本部分描述了草鱼肾细胞系(grass carp kidney cell linc,CIK)的形态、传代培养条件、生长特性、对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于草鱼肾细胞系的培养、使用和保藏。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义3. 1草鱼肾细胞系grass carp kidney cell line,CIK左文功、钱华鑫1984年从草鱼(Ctenopharyngodon idella)肾组织细胞经原代培养、衍生的连续细胞。4细胞的形态、大小与特性4.1 形态为成纤维样细胞(参见图A.1)。4.2 大小经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约11.15μm,其中最大量细胞的峰值直径约9. 63 μm (参见 B. 2)。4.3特性4.3.1生长特性贴壁生长。4.3.2对部分水生动物病病原的敏感性CIK 主要对水生呼肠孤病毒即草鱼出血病病毒(Grass carp reovirus,GCRV;或者称 Grass carphcmorrhagic virus,GCHV)、呼肠孤病毒(Threadfin reovirus,TFV)病毒敏感,接种后的 CPE形态参见图 A.2。5主要材料与仪器设备5.1 水应符合GB/T 6682中一级水的规定。5.2细胞培养液主要成分见附录C.1。1
SC/T 7016. 2—20125.3细胞消化液主要成分及其含量见附录C.2。5.4仪器设备主要包括:生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备;倒置显微镜;一血球计数板或电子细胞计数仪细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件6.1培养温度细胞置于生化培养箱内,在15℃~28℃下培养,其最适生长温度为25℃。6.2 培养液 pH7.2~7.6。7 细胞传代与保藏7. 1传代程序7.1.1吸弃旧培养液在超净工作台内,无菌环境下吸弃长满单层CIK 细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加入细胞消化液,一般在50mL培养瓶中加入5mL左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1mL~0.2mL,加人量必须完全浸没细胞层。贴壁长满的 CIK 消化时间一般为1.5min~3min,细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液,轻轻拍打细胞培养瓶以分散细胞。7.1.3更换细胞生长液与稀释将消化液吸弃后,在 50mL细胞培养瓶中加人 10mL~15mL细胞培养液(见 C.1),按每瓶5mL分成2瓶~3瓶,使细胞浓度保持在1×105个/mL。分瓶后在25℃下培养,8h内细胞贴壁并生长;;18 h后能长满单层细胞;不同规格的细胞培养瓶按培养面每平方厘米加人0.1mL~0.2mL的细胞培养液。7.1.4细胞的传代周期细胞长满单层5d后再次传代较好。7.2细胞的保藏7.2.1保藏条件7.2. 1. 1 温度与天数传代后的CIK经25℃培养24h后,移入生化培养箱15℃或20℃保藏。
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