SN_T 3256-2012出口牛奶中β-内酰胺类和四环素类药物残留快速检测法 ROSA法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3256-2012出口牛奶中B-内酰胺类和四环素类药物残留快速检测法ROSA 法Determination of β-lactams and tetracyclines residues in export milk-ROSA method2013-05-01实施2012-10-23 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局件 SN/T 3256—2012言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局。本标准主要起草人：林杰、黄晓蓉、郑晶、黄娣娇、陈彬、张体银、江树勋、陈健。 SN/T 3256—2012出口牛奶中β-内酰胺类和四环素类药物残留快速检测法　ROSA法范围1本标准规定了出口牛奶中 β-内酰胺类和四环素类药物残留的ROSA筛选检测方法。本标准适用于出口牛奶中β-内酰胺类(包括青霉素G、阿莫西林、氨苄西林、苯唑西林、邻氯青霉素、双氯青霉素、头孢氨芊、头孢唑啉、头孢塞喉）和四环素美（包括四环素、金霉素、土霉素)药物残留的定性快速初筛测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注月期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理ROSA检测方法是应用ROSA分析仪测庭药物残留的方法，该是基于胶体金免疫技术。试剂条胶体金结合垫上包被微生物受体抗体胶体金复合物，检测线分别包被青霉素G抗原和金霉素抗原，控制线包被微生物受体二抗。当样品中含有β内酰胺类和四环素类药物时，会与检测线包被抗原竞争结合金标复合物，金标复合物与检测线包被抗原结告形成红色线，与检测线包被抗原结合的金标复合物移动到控制线与第二抗体结合形成红色线。检测线显色的强度与样品所含药物浓度成反比，检测线浅于控制线为阳性；检测线深于或等于控制线为阴性；控制线不全或没有颜色为无效检测。4 试剂牛奶中β-内酰胺类和四环素类药物残留测定试剂盒（参见附录A)。5设备和材料5.1 ROSA分析仪。5.2ROSA温育器:56℃士1℃。5.3 冰箱:2℃~8℃。5.4移液枪:300 μL。6样品保存牛奶在冰箱4℃士1℃冷藏保存。 SN/T 3256—20127 操作步骤7.1ROSA温育器恒温至56 ℃士1℃。7.2取试剂条，打开温育器盖子，将检测条放在温育器内，将试剂条上的塑料膜小心揭开至白线位置。7.3将牛奶样品充分摇匀，用移液器取300μL土15μL牛奶样品，从试剂条的加样槽边缘小心地加人样品。7.4将塑料膜盖回，将温育器盖子盖上，温育器自动开始8min倒计时。7.58 min 温育完成后,温育器发出蜂鸣声,取出试剂条。8结果判定8.1目视比色取出后观察C线和T线的颜色深浅，按照以下条件判定结果：a）T线浅于C线为阳性;b）T线深于或等于 C线为阴性；c）C线不全或没有颜色为无效检测。8.2ROSA 分析仪读数参照附录B的步骤初始化仪器，然后将检测条插人仪器的读数室，按Enter键开始读数，约11 s后,显示以下结果：a）显示的值为正数,即为阳性结果；b）显示的值为负数，即为阴性结果。9试剂验收新试剂盒使用前应先确认试剂条的有效性。首先使用青霉素G标准品和去离子水配制100ug/L的标准溶液，再用阴性牛奶配制成青霉索 G浓度为 3ug/L的溶液，按以上步骤测定，如果测定结果阳性证明试剂有效可用,如果测定结果阴性证明试剂失效不可用。10 确证本方法为初筛方法，阳性结果应用其他方法进行确证。11检测限见表1。2 SN/T 3256--2012表1ROSA 测定方法的检测限检测限抗生素μg/ L30金霖索30土羅索10四环素3青霉索G4阿莫西林氨苄西林3苯唑西林3030邻氣青霉素30双氮青霖素头孢氨苄2015 头孢唑啉头孢噻呋43 SN/T 3256—2012附录A（资料性附录）牛奶中β内酰胺类和四环素类药物残留测定试剂盒(ROSA试剂盒）A.1 ROSA试制条。A. 22青霉素 G和土霉素混合标准试剂。A.3ROSA试剂盒有效期6个月。? SN/T 3256—2012附录B(资料性附录)ROSA分析仪操作程序1)B.1仪器初始化B.1.1插上电源，按 On/OFF键，打开仪器。B.1.2 按向右箭头键(→)二次r将最上面显示的频道调整至TETR,此频道为 3线模式，正常情况下为快速闪烁(慢速闪烁为两线模式，可按 ESC+“”进行切换）。B.1.3为方便以后检测，请锁定此频道，按ESC键后再按7”键，显示PASSWOR